Translocación del efector SopB de Salmonella Typhimurium en el ganglio linfático mesentérico durante la salmonellosis murina.

GIACOMODONATO, MÓNICA; NOTO LLANA, MARIÁNGELES; SARNACKI SH; CERQUETTI MC

Bs As, Argentina

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología.; 2010

AAM

Los sistemas de secreción tipo tres (SSTT) de Salmonella Typhimurium codificados por las islas de patogénesis 1 y 2 (SPI-1 y SPI-2) son esenciales para la invasión de células epiteliales y para la replicación en macrófagos, respectivamente. El SSTT-1 participa en eventos tempranos de la infección (ej: invasión) mientras que el SSTT-2 media procesos post invasivos (ej: replicación). En contraposición a este modelo, algunos efectores SPI-1 se inducen tardíamente. En este trabajo se analizó la expresión y translocación de SopB in vitro, en cultivos celulares e in vivo durante los estadios tardíos de la infección sistémica murina. Con este objetivo, se construyó una cepa de S. Typhimurium con el efector de interés marcado con el epitope FLAG (SopB::3xFLAG) mediante la técnica de epitope tagging. Dicha cepa se incubó bajo condiciones de cultivo que imitan el ambiente intestinal (condiciones SPI-1) y bajo condiciones que imitan el ambiente intracelular (condiciones SPI-2). Los pellets y los sobrenadantes de los cultivos bacterianos se utilizaron para analizar la expresión y secreción de SopB, respectivamente mediante Western blot utilizando anticuerpos anti FLAG. Como era de esperar la expresión de SopB se observó bajo condiciones SPI-1. Este efector también se sintetizó bajo condiciones intracelulares. Sin embargo, la secreción sólo tuvo lugar bajo condiciones que imitan el ambiente intestinal. Para los experimentos in vivo, monocapas de células HEp-2 y ratones BALB/c fueron inoculados con la cepa SopB-FLAG con una m.o.i de 10:1 mediante un ensayo de protección a gentamicina e intraperitonealmente con una dosis de 107 UFC /ratón, respectivamente. Las células infectadas y los ganglios linfáticos mesentéricos (GLM) murinos fueron procesados a las 24 hs post infección de manera de obtener una fracción insoluble (proteínas expresadas en las bacterias infectantes) y una fracción soluble (proteínas translocadas al citosol). El análisis de las proteínas bacterianas mediante Western blot reveló que SopB se expresa en bacterias que se encontraban infectando las células HEp-2 y el GLM a las 24 hs post infección. Interesantemente, se observó la translocación tardía de SopB al citosol de dichas células. En resumen, nuestros hallazgos indican que la expresión y translocación de SopB in vivo no se encuentra limitada a los primeros estadios de la infección tal como se ha descripto previamente.