CARACTERIZACIÓN FUNCIONAL DEL PROMOTOR DE ACIL-COA SINTETASA 4 EN LÍNEAS CELULARES DE CÁNCER DE MAMA HUMANO

BENZO, YANINA; CASTILLO, ANA FERNANDA; DATTILO, MELINA; ORLANDO, ULISES; HERRERA, LUCÍA; MALOBERTI, PAULA

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Endocrinología Ginecológica y Reproductiva 2018; 2018

Sociedad Argentina de Endocrinología Ginecológica y Reproductiva

Introducción: La expresión de Acil-CoA Sintetasa 4 (ACSL4) en células de cáncer de mama correlaciona con un fenotipo altamente agresivo en este tipo de tumores, pero la regulación transcripcional es desconocida aún. Objetivo: Estudiar la regulación del promotor de ACSL4 en líneas de cáncer de mama humano de diferente agresividad. Materiales y Métodos: El vector pNL1.1 (Promega) conteniendo el promotor de ACSL4 (1,8 Kb) fue transfectado en 4 líneas de cáncer de mama: MDA-MB-231 y Hs578T altamente agresivas y MCF-7 y T47D de baja agresividad. Se diseñaron deleciones unidireccionales sucesivas del extremo 5´ y del 3´ del promotor para mapear zonas activadoras y represoras. Se analizaron los posibles factores de transcripción (FFTT) con el software Genomatix. Se realizó mutación sitio dirigida de sitios de unión de FFTT en el promotor. La unión específica al promotor de ERRα se analizó mediante ensayo de inmunoprecipitación de cromatina (ChIP). Resultados: El promotor fue funcional en las 4 líneas, siendo significativamente mayor su actividad en las altamente agresivas. El análisis bioinformático destacó como FFTT a: RORα, Sp1, ERRα y a la familia E2F. Las deleciones y mutaciones en MDA-MB-231 y en MCF-7 muestran que en ambas líneas existe en el extremo 5´ una zona regulatoria negativa, en la cual se encontró a RORα como represor. Un fragmento del promotor que contiene la secuencia consenso para Sp1 regula positivamente su actividad, coincidentemente con la función observada para Sp1 en ambas líneas. Las deleciones unidireccionales sucesivas en el extremo 3´ del promotor, donde se halla una secuencia consenso para E2FF, demuestran que dicho extremo regula positivamente la transcripción de ACSL4 sólo en MDA-MB-231. ERRα actúa como activador sólo MDA-MB-231. Demostramos la unión efectiva de este FT al promotor de ACSL4 en MDA-MB-231 mediante un ensayo de ChIP. ERRα podría estar involucrado entonces en la regulación positiva de ACSL4 en MDA-MB-231. Conclusiones: El promotor de ACSL4 posee mayor actividad en células de cáncer de mama altamente agresivas. RORα actuaría como represor en el extremo 5´ y Sp1 como activador tanto en MDA-MB-231 como en MCF-7. El extremo 3´ del promotor de ACSL4 regula diferencialmente la transcripción de esta enzima, activándola sólo en MDA-MB-231. ERRα se une al promotor de ACSL4 en MDA-MB-231 y tiene una actividad diferencial con respecto a MCF-7 actuando como activador de la transcripción de ACSL4 sólo en MDA-MB-231.