Caracterización inmunocitoquímica de poblaciones celulares en cultivos de pulpa dental humana

MERHAR, V.A.; ACQUIER, A.; MENDEZ, C.F.; DE COUTO PITA, A.K.; BLANCO, H.A.; MIOZZA, V.; PAZ, C.

Los Cocos, Provincia de Córdoba

Congreso; LI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Odontológica; 2018

Sociedad Argentina de Investigación Odontológica

Las células madre mesenquimales son célulaspluripotentes de morfología fibroblástica con capacidad de diferenciación haciadiversos linajes celulares. Reportamos previamente que la adición de factorescondicionantes de diferenciación al medio de cultivo de células de Pulpa DentalHumana (PDH) induce cambios morfológicos y funcionales en las células.Objetivo: determinar la presencia de células pluripotenciales en cultivosprimarios de pulpa dental humana. Métodos: se establecieron cultivos porexplante de células a partir de pulpa disgregada mecánicamente luego de suremoción de molares retenidos extraídos de donantes adultos por fallas deerupción. El tejido se incubó en medio de Dulbecco modificado por Eagle con10%de suero fetal bovino (SFB) y L-glutamina (DMEM) o en DMEM conteniendofactores de diferenciación (DMEM-OD). La detección de células pluripotencialesse realizó a través de la marcación inmunocitoquímica del antígeno desuperficie CD105(Endoglina) utilizando un anticuerpo monoclonal específico y unanticuerpo secundario conjugado con Cy3. Para la tinción de los núcleoscelulares se empleó el colorante 4',6-diamino-2-fenilindol (DAPI), y lasmuestras se analizaron en un microscopio convencional de epifluorescencia. Laexpresión de CD105 se corroboró, a su vez, por medio de Western Blot.Resultados: se constata la expresión de CD105 en la membrana plasmática decélulas de morfología fibroblástica en los cultivos primarios de PDH. Ladensidad de marcación de células CD105+ es mayor en el área que rodea elexplante de tejido pulpar y disminuye hacia la periferia del cultivo (15±2 vs3±1 células/campo). A su vez, cuando se analizó en cultivos establecidos(cuarto repique), el número de células CD105+ disminuyó significativamente(prueba t de Student) en presencia de medio DMEM-OD con relación a los cultivosmantenidos en medio DMEM. La expresión del antígeno CD105 se constató, ademáspor medio de Western Blot. Conclusión: los precursores mesenquimáticos expresandistintos antígenos de superficie, entre los cuales se encuentra CD105.Nuestros resultados demuestran la existencia de células pluripotenciales en eltejido pulpar y sugieren que la adición de factores condicionantes inicia elproceso de diferenciación a células con capacidad de producción de tejido mineral.Financiamiento y Comité de Ética: UBACYT 20020150100172BA.