Participación de ERK1/2 en el condicionamiento a la diferenciación de cultivos primarios de pulpa dental

DE COUTO PITA, A.K.; MENDEZ, C.F.; MERHAR, V.A.; PAZ, C.; ACQUIER, A.

Mar del Plata

Congreso; XLIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Odontológica; 2016

Sociedad Argentina de Investigación Odontológica

Reportamos previamente el establecimiento de cultivos primarios de células de pulpa dental(PD) humana cuya morfología cambia en presencia de factores de diferenciaciónosteoblástica. Laquinasa de señales extracelulares tipo 1 y 2, ERK 1/2, (ERK) es activada por unavariedad de receptores implicados en procesos de crecimiento y diferenciaciónpor lo que regula numerosas funciones celulares.Objetivo: el objetivodel presente trabajo ha sido investigar si la adición de factorescondicionantes de diferenciación cambia la tasa de proliferación celular, y determinarla posible participación de ERK en el inicio del proceso de diferenciación acélulas con capacidad de producción de tejido mineral.Materiales y métodos:se establecieron cultivos por explante de células a partir de pulpa disgregadamecánicamente luego de su remoción de molares retenidos (n=2) extraídos dedonantes adultos por fallas de erupción. El tejido se incubó a 37°C y 5% CO2 enmedio de Dulbecco modificado por Eagle con 10% de suero fetal bovino (SFB) yL-glutamina (DMEM) o en DMEM conteniendo 300 mMácido ascórbico, 10 mMb-glicerofosfato, 15%SFB y 0,5 mM dexametasona como factores de diferenciación (DMEM-OD). Laproliferación celular se analizó colorimétricamente luego de la tinción convioleta de cristal y la activación de ERK por Western blot utilizandoanticuerpos específicos anti fosfo-ERK y ERK total.Resultados:en cultivo, las células proliferaron en medio DMEM hasta el día 7 con un tiempode duplicación de 24 hs, mientras que la incubación en medio DMEM-OD resultó enuna reducción significativa de la proliferación (p<0,01 por ANOVA de doblevía, n=3) a todos los tiempos ensayados. La adición de dexametasona al medioDMEM redujo significativamente (p<0,01) la proliferación (0,13±0,01 vs.0,38±0,01 UA para DMEM + dexametasona y DMEM, respectivamente) mientras que losdemás factores no tuvieron efecto. DMEM-OD promovió la activación de ERK en formadependiente del tiempo (entre 5 y 120 min) con un máximo a los 20 min.Conclusión:nuestros resultados demuestran que la adición de factores de diferenciación almedio de cultivo detiene la capacidad de proliferación celular y promueve la activaciónde ERK sugiriendo la participación de esa quinasa en el inicio del proceso dediferenciación odontoblástico.