La hormona ACTH promueve la interacción entre paxilina y PTP-PEST, una tirosina fosfatasa regulada por fosforilación por PKA

GOROSTIZAGA, AB; ACQUIER, A; MORI SEQUEIROS GARCIA, MM; MENDEZ, CF; PAZ, C

Mar del Plata

Congreso; LIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2014

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Hemos descripto que ACTH incrementa la actividad de proteína tirosina fosfatasas (PTPs) en el citosol de zona fasciculata (ZF) de adrenal de rata y que promueve la activación de una PTP de 115 kDa que identificamos como PTP-PEST. Además demostramos que ACTH promueve la fosforilación de PTP-PEST mediada por PKA y su consecuente activación. Se conoce además que en células adrenocorticales de la línea Y1 la estimulación con ACTH u 8Br-AMPc produce un cambio en la morfología celular conocido como rounding-up, que está asociado a la desfosforilación en tirosina de paxilina, una proteína de citoesqueleto. Dado que paxilina es sustrato de PTP-PEST en varios sistemas, nuestro objetivo fue analizar la posible interacción entre paxilina y esa fosfatasa en ZF de adrenal de rata y en células Y1. Con este fin se realizó la inmunoprecipitación de paxilina con un anticuerpo específico a partir de las proteínas citosólicas de ZF de adrenales de ratas, controles o tratadas con ACTH durante 15 minutos. Los inmunoprecipitados (IP) se analizaron por SDS-PAGE en geles de actividad de tirosina fosfatasa. En las muestras provenientes de ratas tratadas con ACTH, se detectó una banda de actividad correspondiente a una proteína de 115 kDA que no se detectó en las muestras provenientes de ratas controles. El análisis por Western blot de otra alícuota de los IP mostró niveles similares de paxilina en las muestras de ratas controles y estimuladas. Por microscopía confocal, utilizando anticuerpos anti-paxilina y anti PTP-PEST, se observó que en células Y1 la estimulación promueve la colocalización de estas dos proteínas, además del cambio en la morfología. Concluimos que ACTH promueve la interacción de PTP-PEST con paxilina, lo cual sugiere que esa fosfatasa contribuye  ?al menos en parte? en la desfosforilación de paxilina. PTP-PEST podría participar en la dinámica mitocondrial inducida por hormonas esteroidogénicas y en la regulación de la síntesis de esteroides.