Diferenciación de células en cultivo primario de pulpa dental humana

DE COUTO PITA, A.K.; MENDEZ, C.F.

Mar del Plata

Congreso; XLVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Odontológica; 2013

Sociedad Argentina de Investigación Odontológica

Reportamos previamente el establecimiento de cultivos primarios de células de pulpa dental (PD) de rata que adquieren capacidad mineralizante en presencia de factores de diferenciación osteoblástica. El odontoblasto es una célula diferenciada a partir de células pluripotenciales mesenquimáticas. Si bien su morfología y función son conocidas, su proceso de diferenciación no se conoce aún en detalle. Objetivo: establecer un cultivo celular primario de PD humana como modelo para el estudio de factores de diferenciación de células pluripotenciales a formadoras de tejido mineral. Materiales y métodos: se establecieron cultivos por explante de células a partir de pulpa disgregada mecánicamente luego de su remoción de molares retenidos extraídos de donantes adultos por fallas de erupción. El tejido se incubó en medio de Dulbecco modificado por Eagle con 10% de suero fetal bovino (SFB) y L-glutamina (DMEM) o en DMEM conteniendo 300 mM ácido ascórbico, 10 mMb-glicerofosfato, 15% SFB y 2,5 nM dexametasona (DMEM-OD) como factores condicionantes de diferenciación, a 37°C y 5% CO2. La proliferación celular se analizó colorimetricamente luego de la tinción con violeta de cristal. Resultados: la disgregación mecánica del tejido y su incubación en DMEM resultó en el establecimiento de un cultivo a predominio de células de morfología fusiforme. En cultivo, las células proliferaron en medio DMEM hasta el día 7 con un tiempo de duplicación de 24 hs, mientras que la incubación en medio DMEM-OD resultó en una reducción significativa de la proliferación (p<0,01 por ANOVA de doble vía) a todos los tiempos ensayados. La adición de dexametasona al medio DMEM redujo significativamente (p<0,01) la proliferación (0,13±0,01 vs. 0,38±0,01 UO para DMEM + dexa y DMEM, respectivamente) mientras que los demás factores no tuvieron efecto. Conclusión: nuestros resultados confirman la posibilidad de establecer cultivos de PD humana y demuestran que la adición de factores de diferenciación al medio de cultivo detiene la capacidad de proliferación celular, sugiriendo el inicio del proceso de diferenciación odontoblástico.