DESARROLLO DE UN MODELO OVIDUCTAL IN VITRO PARA SU IMPLEMENTACIÓN EN TÉCNICAS BIOTECNOLÓGICAS REPRODUCTIVAS EN LA ESPECIE EQUINA

MICAELA VON MOYEREN; OSYCKA-SALUT, CLAUDIA; BRENDA GIMENO; ADRIÁN MUTTO; EDUARDO MARTÍNEZ LEÓN; MARÍA VICTORIA BARIANI

CABA

Jornada; IX Jornadas de Jóvenes Investigadores; 2019

Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Buenos Aires

La fecundación in-vitro (FIV) es ampliamente utilizada para la producción de embriones. Al día de hoy no es posible aplicarla en equinos al no estar descriptas las condiciones para inducir eficientemente la capacitación y la hiperactivación en los espermatozoides in-vitro. Estos procesos le confieren al espermatozoide un patrón característico de motilidad y la capacidad de iniciar la reacción acrosomal para fecundar al oocito. Fisiológicamente, para que el espermatozoide adquiera capacidad fecundante debe atravesar el tracto reproductor de la hembra. El oviducto participa en la selección de subpoblaciones de espermatozoides competentes para fecundar el oocito. La unión y la liberación de los espermatozoides del epitelio oviductal son modulados por la capacitación y la hiperactivación espermática. Dada la importancia del oviducto al ser el ambiente fisiológico donde ocurre la adquisición de la capacidad fecundante del espermatozoide y la fecundación, el objetivo del trabajo fue establecer un cultivo oviductal in vitro y evaluar su efecto en la regulación de la interacción espermatozoide-oviducto sobre la inducción de la capacitación e hiperactivación de los espermatozoides en equinos. En primer lugar se desarrollaron cultivos primarios de células epiteliales oviductales (CEO) equinas los cuales presentaron los marcadores epiteliales citoqueratina y e-cadherina en estudios de RT-PCR e inmunofluorescencia. Posteriormente se realizaron co-cultivos de espermatozoides criopreservados (n=3) con las CEO obtenidas y se evaluó el estado acrosomal por inmunofluorescencia utilizando PSA-FITC y la motilidad por microscopía. La población espermática que se adhirió a las CEO in vitro presentó su acrosoma intacto y mantuvo la motilidad, lo que sugiere una selección por parte del modelo oviductal implentado. Por último, los co-cultivos espermatozoides-CEO fueron incubados en condiciones capacitantes y se recuperó la población espermática liberada. Estos espermatozoides fueron cuantificados con un hemocitómetro y se realizaron estudios de inmunofluorescencia para ver la integridad del acrosoma (PSA-FITC), la viabilidad (Hoechst 258) y el estado de fosforilación de proteínas en residuos serina/treonina (anti- pPKA) y tirosina (anti-pTyr). A su vez, se evaluó la motilidad de los mismos utilizando el sistema CASA. Los resultados indican que, previa selección por las CEOs y en presencia de un medio capacitante, se libera una mayor cantidad de espermatozoides vivos, capacitados, con motilidad progresiva y con el acrosoma intacto respecto a un medio no capacitante. Por lo tanto, esta población espermática podría ser recuperada para ser utilizada en futuros ensayos de FIV u otras técnicas como ICSI dado su potencial fecundante.La innovación en los medios utilizados in vitro que incrementen la capacidad fecundante de los espermatozoides aportarían herramientas para resolver la problemática de la FIV en esta especie siendo una nueva metodología que reemplace/mejore otras de alta complejidad para la producción de potrillos de alto valor genético. PICT FONCYT 2016-3138.