Hepatopatía grasa no alcohólica: la menor expresión de TLR9 en células CD8 circulantes protegería a los pacientes con esteatosis simple de la excesiva diferenciación en un perfil citotóxico.

ALEGRE, NADIA SOLEDAD; BENAVIDES JAVIER; BILLORDO, LUIS ARIEL; GARCIA DANIEL; PONCINO DANIEL; CECILIA CLAUDIA GARCÍA; COLOMBATO LUIS; CHERÑAVSKY, ALEJANDRA CLAUDIA

Mar del Plata

Congreso; Congreso Argentino de gastroenterología 2018; 2018

Hepatopatía grasa no alcohólica: la menor expresión de TLR9 en células CD8 circulantes protegería a los pacientes con esteatosis simple de la excesiva diferenciación en un perfil citotóxico.Alegre, NS(1); Garcia, CC(1); Billordo, LA(1); Benavides, J(2); Colombato, L(2); Poncino, D(3); García, D(3); Cherñavsky, AC(1)(1)Instituto de Inmunología, genética y metabolismo, CONICET-UBA. Buenos Aires, Argentina (2)(2) Sección Hepatología, Servicio de Gastroenterología, Hospital Británico . Buenos Aires (3)Sección Hepatología, Sanatorio Méndez ObsBA. Buenos Aires, ArgentinaIntroducción: Un factor clave para el desarrollo de la hepatopatía grasa no alcohólica (HeGNA) es la translocación de ADN bacteriano el cual es reconocido por el receptor tipo Toll 9 (TLR9). La señalización vía TLRs en células adaptativas favorece su activación, la diferenciación y la generación de células de memoria. Hemos descripto una menor expresión de TLR9 en células circulantes CD8+ en estadios de las HeGNA de baja inflamación como la esteatosis simple (ES), pero no en los de mayor inflamación como la esteatohepatitis (EH), y una menor activación vía receptor T en presencia de un ligando para TLR9 utilizado como co-estímulo (oligonucleótido CpG-ODN).Objetivos: Evaluar si el efecto co-estimulatorio del CpG-ODN sobre la diferenciación y la expresión de CCR7 en células CD8+ sustenta posibles diferencias en el perfil citotóxico (en términos de células productoras de IFNg) y/o en la composición del pool circulante de células CD8+ de memoria (en términos de expresión del marcador CCR7) entre pacientes con HeGNA y controles (Co).Metodología: Las células mononucleares de sangre periférica (CMSP) fueron obtenidas mediante gradiente de Ficoll-Hypaque a partir de sangre de pacientes con HeGNA (n=23) y Co (n=28). CMSP de 11 Co y 16 HeGNA fueron estimuladas con PMA (25 ng/ml) / ionomicina (1mM) en presencia de Brefeldina A (1 mM) (4h, 37ºC) y marcadas con anticuerpos anti-CD8 e -IFNg. Para el estudio de subpoblaciones de memoria, CMSP de 8 Co y 7 HeGNA fueron marcadas con anticuerpos anti-CD45RO, -CD8 y -CCR7. Adicionalmente, CMSP de 4 Co y células CD45RO de 5 Co obtenidas por selección negativa, fueron estimuladas con anti-CD3 (0,25 mg/ml) +/- CpG-ODN (2 mM) (72h, 37ºC) y marcadas con anticuerpos anti-CD8 y -IFNg, o anti-CD8 y -CCR7. Los resultados fueron adquiridos por citometría de flujo y analizados mediante las pruebas de Mann-Whitney o Kruskall-Wallis.Resultados: En los pacientes con EH, la frecuencia de células CD8+IFNg+ fue mayor (p=0.0005 vs. Co; p=ns, vs. ES), mientras que las subpoblaciones CD45RO+CD8+CCR7+ y CD45RO+CD8+CCR7- fueron similares en HeGNA y Co (p=ns). La frecuencia de células CD8+IFNg+ aumentó con la co-estimulación por CpG-ODN (p=0,0286, anti-CD3 + CpG-ODN vs. anti-CD3) mientras que la co-estimulación de células CD45RO CD8+ no tuvo efecto diferencial sobre el índice de frecuencias CD8+CCR7-/CD8+CCR7+ (p=ns, anti-CD3 + CpG-ODN vs. anti-CD3).Conclusión: En los pacientes con ES, la menor expresión de TLR9 protegería a las células CD8 de una excesiva diferenciación en un perfil citotóxico. En pacientes con EH factores adicionales superarían dicho efecto protector y contribuirían al aumento de células citotóxicas. La composición similar del pool de células de memoria en HeGNA y Co es consistente con la ausencia de modulación de CCR7 vía TLR9.