Participación de TLR4 y TLR9 en la respuesta inmunológica adaptativa en pacientes con Enfermedades del Hígado Graso No Alcohólico

ALEGRE NADIA S.; INZAUGARAT ME; CECILIA GARCPIA; BILLORDO LA; ROMERO GA; ROMEO JM; ALMEIGEIRAS B; A CHERÑAVSKY

Buenos Aires

Congreso; XVIII Congreso Argentino de Hepatología; 2015

Asociación Argentina para el Estudio de las Enfermedades hepáticas

Participación de TLR4 y TLR9 en la respuesta inmunológica adaptativa en pacientes con Enfermedades del Hígado Graso No AlcohólicoAlegre Nadia Soledad*1, Inzaugarat María Eugenia*1, García Cecilia Claudia1, Billordo Luis Ariel1, Romeo Juan Manuel2, Ameigeiras Beatriz2, Cherñavsky Alejandra Claudia11Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo, Hospital de Clínicas ?José de San Martín?2Unidad de Gastroenterología, Hospital General de Agudos "JM Ramos Mejia" Introducción: Los pacientes con enfermedades del Hígado Graso No Alcohólico (EHGNA)se caracterizan por un aumento en la permeabilidad intestinal que eleva la afluencia de subproductos bacterianos a sangre. Los receptores tipo Toll (TLR) 4 y 9, que reconocen lipopolisacáridos (LPS) y ADN bacteriano respectivamente participan en la respuesta innata y han sido involucrados en EHGNA. Su reciente identificación en linfocitos T (LT) les confiere un potencial papel modulador de la respuesta adaptativa. La prolongada estimulación de linfocitos in vivo podría inducir la sobreexpresión de TLR4 y 9 en LT.Objetivo: evaluar la distribución de ambos TLRs en linfocitos CD4 y CD8 de sangre e hígado de pacientes con EHGNA y sus posibles efectos proinflamatorios. Pacientes y Métodos: Utilizamos sangre entera y biopsias hepáticas de pacientes adultos con EHGNA (n=24) y controles (Co, n=29). Células mononucleares de sangre periférica (CMSP) y suspensiones de células hepáticas obtenidas por gradiente de Ficoll-Hypaque o disgregación mecánica, respectivamente, fueron marcadas con mAbs anti-CD4, anti-CD8, anti-TLR9 y anti-TLR4, y analizadas por citometría de flujo. Se cuantificó el porcentaje de células positivas para TLR4 o la intensidad media de fluorescencia (IMF) para TLR9. Por otra parte, mediante selección negativa se obtuvo la fracción CD3+ de CMSP, la cual se estimuló con anti-CD3 soluble [500ng/ml] ± LPS [1μg/ml] por 72 h. Se cuantificó la expresión de TLR4 mediante citometría de flujo y la producción de IFN- por ELISA. Para el análisis estadístico de los datos se emplearon la prueba no-paramétrica de Mann-Whitney, ANOVA de 2 factores y el coeficiente de correlación de Spearman según se indica en cada caso. Resultados: Hallamos un mayor porcentaje de células infiltrantes CD4+TLR4+ y CD8+TLR4+ (p=0.02 y p=0.02, n=8, Mann-Whitney) y una tendencia a un mayor porcentaje de células circulantes CD4+TLR4+ y CD8+TLR4+ (p=0.057 y p=0.057, n=4, Mann-Whitney) en EHGNA vs. Co. Sin embargo para TLR9 se obtuvo similar IMF en ambos grupos (p=ns, Mann-Whytney). La estimulación con LPS indujo un aumento en la producción de IFN- en células CD3+ (p