Flujo dinámico del medio ambiente al nicho nosocomial de los plásmidos con replicación tipo ColE1

ÁLVAREZ VE; CHAMOSA LS; PAVAN F; CENTRÓN D.; FALCONE-DIAS M; NARDELLI M; FUJIMURA LEITE C; RODRÍGUEZ MC; PISTORIO M; QUIROGA MP

Rosario

Congreso; XIV Congreso Argentino de Microbiología, XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología (CAM/ALAM 2016); 2016

Asociación Argentina de Microbiología/Asociación Latinoamericana de Microbiología

Los plásmidos juegan un rol crucial en la TransferenciaLateral de Resistencia a Antibióticos (plásmidos R). Usualmente no sonesenciales para su huésped, pero en el nicho nosocomial son decisivos para lasupervivencia. Dentro de los plásmidos R, los tipo ColE1 poseen un estrechorango de huéspedes y presentan un alto número de copias, estando la replicacióncontrolada por 2 ARNs (ARNI y ARNII) transcriptos en el entorno del oriV. Para entender su diseminación exitosa en el nicho clínico nos propusimosinvestigar cómo es el flujo genómico y ecológico de los plásmidospertenecientes a esta familia de replicones identificando su asociación adeterminantes de resistencia a antibióticos y a otros elementos del mobiloma. Seextrajo el ADN total de 114 aislamientos de bacterias Gram-Negativas de la clínica (n=90) y del ambiente(n=24) (2000-2014) y se pesquisó la región de replicación ColE1 usando PCR ysecuenciación. Trece de los 90 aislamientos clínicos, poseían secuencias conmás del 81% de identidad con replicones ColE1, siendo enterobacterias (n=12) y una Pseudomonas aeruginosa. Posteriormente, las cepas positivas fueronanalizadas por PCR inversa, identificando 3 plásmidos menores de 5000pb,idénticos a pPAB19-3 y a pPAB19-4 en cepas de Salmonella enterica y Escherichiacoli. En dos cepas ambientales se encontraron secuenciasrelacionadas a replicones tipo ColE1(Enterobacter spp. y Yersinia spp.). Las mismas fueron aisladas en Tierradel Fuego en zonas con alto y bajo nivel de urbanización, respectivamente. Mediante el algoritmo BLAST se identificaronsecuencias de más del 84% de identidad en cepas pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae de origen clínico de 24países en 4 continentes (n=51) y de origen ambiental en 3 continentes (n=12).Con las secuencias recuperadas se realizó la filogenia del amplicón usando el GeneticsComputer Group, alineamiento con ClustalW y el método de Máxima Verosimilitud. Seidentificaron 3 grupos definidos por el tamaño de los plásmidos tipo ColE1. Elprimero contiene los plásmidos de más de 15.000pb (n=6), todos plásmidos Rinvadidos por transposones Tn3-like.El segundo grupo contiene plásmidos de entre 5000 a 15000pb siendo 7 plásmidosR (n=14). El tercer grupo corresponde a plásmidos menores de 5000pb, 23plásmidos R (n=30) y 12 poseían el gen qnrB19.Estudios filogenéticos relacionaron 2 clustersde resistencia antibiótica que reflejan la diseminación de determinantesespecíficos blaCTX-M-5, y qnrB19 con plásmidos R de los grupos 2 y3, respectivamente.El alto número de copias de este replicón aumentala probabilidad de su diseminación en el medio ambiente y la clínica. Losestudios filogenéticos con replicones de origen ambiental y clínico, así comola asociación específica de determinantes de resistencia a clusters particulares,  indican que este replicón está capacitado para?cazar? y diseminar genes del ambiente a la clínica y viceversa, incluyendomecanismos de resistencia a antibióticos.