Flujo dinámico del medio ambiente al nicho nosocomial de los plásmidos con replicación tipo ColE1

FALCONE‐DIAS, M.; NARDELLI, M.; FUJIMURA LEITE, C.; ÁLVAREZ, V.; CHAMOSA, L.; PAVAN, F.; CENTRON, D.; RODRÍGUEZ, M. C.; PISTORIO, M.; QUIROGA, M. P.

Rosario

Congreso; XXIII CONGRESO LATINOAMERICANO DE MICROBIOLOGÍA - XIV CONGRESO ARGENTINO DE MICROBIOLOGIA; 2016

Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

Los plásmidos juegan un rol crucial en la Transferencia Lateral de Resistencia a Antibióticos (plásmidos R). Usualmente no son esenciales para suhuésped, pero en el nicho nosocomial son decisivos para la supervivencia. Dentro de los plásmidos R, los tipo ColE1 poseen un estrecho rangode huéspedes y presentan un alto número de copias, estando la replicación controlada por 2 ARNs (ARNI y ARNII) transcriptos en el entorno deloriV. Para entender su diseminación exitosa en el nicho clínico nos propusimos investigar cómo es el flujo genómico y ecológico de losplásmidos pertenecientes a esta familia de replicones identificando su asociación a determinantes de resistencia a antibióticos y a otroselementos del mobiloma. Se extrajo el ADN total de 114 aislamientos de bacterias Gram‐Negativas de la clínica (n=90) y del ambiente (n=24)(2000‐2014) y se pesquisó la región de replicación ColE1 usando PCR y secuenciación. Trece de los 90 aislamientos clínicos, poseían secuenciascon más del 81% de identidad con replicones ColE1, siendo enterobacterias (n=12) y una Pseudomonas aeruginosa. Posteriormente, las cepaspositivas fueron analizadas por PCR inversa, identificando 3 plásmidos menores de 5000pb, idénticos a pPAB19‐3 y a pPAB19‐4 en cepas deSalmonella enterica y Escherichia coli. En dos cepas ambientales se encontraron secuencias relacionadas a replicones tipo ColE1 (Enterobacterspp. y Yersinia spp.). Las mismas fueron aisladas en Tierra del Fuego en zonas con alto y bajo nivel de urbanización, respectivamente.Mediante el algoritmo BLAST se identificaron secuencias de más del 84% de identidad en cepas pertenecientes a la familia Enterobacteriaceaede origen clínico de 24 países en 4 continentes (n=51) y de origen ambiental en 3 continentes (n=12). Con las secuencias recuperadas se realizóla filogenia del amplicón usando el Genetics Computer Group, alineamiento con ClustalW y el método de Máxima Verosimilitud. Se identificaron3 grupos definidos por el tamaño de los plásmidos tipo ColE1. El primero contiene los plásmidos de más de 15.000pb (n=6), todos plásmidos Rinvadidos por transposones Tn3‐like. El segundo grupo contiene plásmidos de entre 5000 a 15000pb siendo 7 plásmidos R (n=14). El tercergrupo corresponde a plásmidos menores de 5000pb, 23 plásmidos R (n=30) y 12 poseían el gen qnrB19. Estudios filogenéticos relacionaron 2clusters de resistencia antibiótica que reflejan la diseminación de determinantes específicos blaCTX‐M‐5, y qnrB19 con plásmidos R de los grupos 2y 3, respectivamente.El alto número de copias de este replicón aumenta la probabilidad de su diseminación en el medio ambiente y la clínica. Los estudiosfilogenéticos con replicones de origen ambiental y clínico, así como la asociación específica de determinantes de resistencia a clustersparticulares, indican que este replicón está capacitado para ?cazar? y diseminar genes del ambiente a la clínica y viceversa, incluyendomecanismos de resistencia a antibióticos.