Expresión y escalado en biorreactor de tanque agitado del HBsAg como prueba de concepto para impulsar en nuestro país la producción nacional de la vacuna anti-hepatitis B

EGUIBAR NM; NUSBLAT AD; LIMERES MJ; RODRIGUEZ DEL VALLE N; CUESTAS ML; PERAZZO P; NOSEDA DG

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología.; 2016

Introducción: Pichia pastoris es una levadura metilotrófica facultativa que se reproduce por gemación y posee ciertas propiedades que justifican el éxito de su utilización como sistema eucariota de expresión de proteínas heterólogas.Sus principales características son la existencia de un promotor fuerte y altamente regulable: el promotor de la alcohol oxidasa 1 (AOX1); y es un microorganismo preferentemente respirativo. Este hecho evita la generación de subproductos indeseables típicos de procesos fermentativos, como el etanol, lo que facilita su cultivo a elevadas densidades celulares (>100 g de peso seco/L). Debido a su mayor nivel de expresión como también su menor costo se elige a P. pastoris como sistema de expresión para la producción del Antígeno de Superficie del virus Hepatitis B (HBsAg), tanto salvaje como mutado.Objetivo: Utilizar P. Pastoris como sistema de expresión para la producción del HBsAg y realizar una prueba concepto a nivel industrial en Fermentador de 6 litros.Materiales y Métodos: Se realizó la prueba concepto con un biorreactor de tanque agitado mediante la aplicación de un proceso de cuatro etapas alternando con sistemas de cultivo de batch y fed-batch durante 7 días, y utilizando diferentes fuentes de carbono. Además se comparó con la expresión en Erlenmeyers en cuanto al nivel de biomasa y la expresión de la proteína recombinante luego de la inducción con metanol como única fuente de carbono. Finalmente se determinó la velocidad de crecimiento específico (µ) junto con el rendimiento de biomasa en función del sustrato consumido (Yx/s).Resultados: Los niveles de antígeno expresado fueron aproximadamente 4 veces mayores en el fermentador que en el Erlenmeyer aunque la µ obtenida en las diferentes etapas del biorreactor fue disminuyendo debido a los cambios en el modo de fermentación.Conclusiones: P. pastoris constituye un buen sistema de expresión para la producción del HBsAg a nivel industrial en Fermentador utilizando su capacidad metilotrófica para inducir la expresión del antígeno con metanol como única fuente de carbono.