Estudios in vitro de patogénesis de la infección por el virus hepatitis C (HCV)

MINASSIAN ML; EGUIBAR N; PERAZZO P; GENTILE E; CASTILLO AI; DELFINO C; MATHET V

C.A.B.A.

Congreso; XVIII Congreso Argentino de Hepatología; 2015

Asociación argentina para el estudio de las enfermedades del hígado.

Introducción: Se han documentado numerosos efectos biológicos de la proteína Core del HCV. Entre ellos, algunos estudios indican que dicha proteína tiene funciones pro-apoptóticas mientras que otros le adscriben un papel anti-apoptótico. La razón de esta discrepancia es aún desconocida. También se desconoce el efecto de la expresión de Core en el contexto -?más semejante? a la infección natural- de las proteínas no estructurales sobre la regulación de la apoptosis. Objetivo: Analizar el efecto de la expresión de Core -de los subtipos 1b y 2c del HCV- aislada y en el contexto de otras proteínas virales al utilizar genomas artificiales auto-replicativos in vitro, sobre la apoptosis celular. Materiales y Métodos: Se utilizaron los sistemas de replicones genómico y sub-genómico correspondientes al genotipo 1b en células Huh7.5 (denominados Huh7.5 FL y Huh7.5 SG, respectivamente). Se procedió a la determinación de la apoptosis inducida con Staurosporina (STR) 1 uM durante 6 h en: a) células Huh7.5 que expresaron transitoriamente de manera independiente la proteína Core del HCV de los subtipos 1b o 2c; b) células Huh7.5 SG que expresaron transitoriamente las mismas proteínas del ítem anterior; c) células Huh7.5 FL. En los cultivos con expresión transitoria de Core (cultivos a y b), la inducción con STR se realizó transcurridas 48 h post-transfección. De esta manera, el tiempo total de expresión transitoria fue de 54 h. Transcurridos los tiempos de inducción con STR, se determinó la apoptosis mediante marcación con Anexina V-FITC/Yoduro de propidio (IP) y mediante ensayo de hipodiploidía con IP y citometría de flujo. Resultados: La expresión transitoria de Core de los subtipos 1b y 2c del HCV durante 54 h se asoció a un efecto pro-apoptótico en células Huh7.5 y Huh7.5 SG. La expresión de las mismas en células tratadas con STR durante 6 h se asoció a un efecto aditivo pro-apoptótico (n=4; p0,05). No se observaron diferencias estadísticamente significativas entre los ensayos que evaluaron la expresión de las proteínas virales correspondientes a los subtipos 1b y 2c. Conclusiones: El efecto pro-apoptótico de la expresión transitoria de las proteínas Core 1b y 2c fue mayor en células Huh7.5 SG que en células Huh7.5, sugiriendo un efecto aditivo en la promoción de la apoptosis dado por las proteínas no estructurales virales. Sin embargo, se observó la misma diferencia al compararse con las células Huh7.5 FL, que expresan tanto las proteínas estructurales como no estructurales virales. Esto podría atribuirse a la diferencia existente en los niveles de expresión de las proteínas virales a partir de los replicones genómicos y subgenómicos con respecto a los altos niveles de expresión transitoria de la proteína Core a partir de los plásmidos de expresión.