ESTUDIOS IN VITRO DE PATOGÉNESIS DE LA INFECCIÓN POR EL VIRUS DE HEPATITIS C (HCV)

MINASSIAN ML; EGUIBAR N; PERAZZO P; GENTILE E; CASTILLO AI; DELFINO C; MATHET V; CUESTAS ML; OUBIÑA J

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología y el II Congreso Latinoamericano de Virología; 2015

Asociaciòn Argentina de Microbiología

Se handocumentado numerosos efectos biológicos de la proteína Core del HCV. Entre ellos, algunos estudios indican que dichaproteína tiene funciones pro-apoptóticas mientras que otros le adscriben unpapel anti-apoptótico. La razón de esta discrepancia es aún desconocida. Tambiénse desconoce el efecto de la expresión de Coreen el contexto -?más semejante? a lainfección natural- de las proteínas no estructurales sobre la regulación dela apoptosis. El objetivo del presente trabajo fue analizar el efecto de laexpresión de Core -de los subtipos 1by 2c del HCV- aislada y en el contexto de otras proteínas virales al utilizargenomas artificiales auto-replicativos invitro, sobre la apoptosis celular. Para ello, se utilizaron los sistemas dereplicones genómico y sub-genómico correspondientes al genotipo 1b en célulasHuh7.5 (denominados Huh7.5 FL y Huh7.5 SG respectivamente). Se procedió a la determinación de la apoptosis inducidacon Staurosporina (STR) 1 uM durante 6 h en: a) Células Huh7.5 que expresaron transitoriamente de maneraindependiente la proteína Core delHCV de los subtipos 1b y 2c; b) Células Huh7.5 SG que expresaron transitoriamente las mismas proteínas del ítemanterior; c) Células Huh7.5 FL. En los cultivos conexpresión transitoria de Core (cultivosa y b), la inducción con STR se realizó transcurridas 48 h post-transfección.De esta manera, el tiempo total de expresión transitoria fue de 54 h. Transcurridoslos tiempos de inducción con STR, se determinó la apoptosis mediante marcación con AnexinaV-FITC/Yoduro de propidio (IP) y mediante ensayo de hipodiploidía con IP y citometríade flujo. La expresión transitoria de Core de los subtipos 1b y2c del HCV durante 54 h se asoció a un efecto pro-apoptótico en células Huh7.5y Huh7.5 SG. La expresión de las mismas en células tratadas con STRdurante 6 h se asoció a un efecto aditivo pro-apoptótico (n=4; p<0,05). Por otro lado al determinar el contenidohipodiploide del DNA celular no se observó efecto alguno sobre la apoptosistardía ni efecto aditivo tras la inducción con STR debido a la expresióntransitoria de dichas proteínas (n=2; p>0,05).En ninguno de estosensayos se observarondiferencias estadísticamente significativas entre los subtipos de las proteínasvirales expresadas. En conclusión, el efecto pro-apoptótico de la expresióntransitoria de las proteínas Core 1by 2c fue mayor en células Huh7.5 SG que en células Huh7.5, sugiriendo un efectoaditivo en la promoción de la apoptosis dado por las proteínas no estructuralesvirales. Sin embargo, se observó la misma diferencia al compararse con lascélulas Huh7.5 FL, que expresan tanto las proteínas estructurales como noestructurales virales. Esto podría deberse a la diferencia existente en losniveles de expresión de las proteínas virales a partir de los repliconesgenómicos y subgenómicos con respecto a los altos niveles de expresióntransitoria de la proteína Core apartir de los plásmidos de expresión.