IMPAM   23988
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES EN MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA MEDICA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Características genéticas de Staphylococcus aureus relacionadas con la capacidad de formar biopelícula
Autor/es:
LOMBARTE SERRAT ANDREA; DOTTO CRISTIAN; SORDELLI DANIEL; CASAS ADRIANA; GIACOMODONATO MONICA; BUZZOLA FERNANDA
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; 15º Congreso Internacional de Medicina Interna del Hospital de Clínicas; 2014
Institución organizadora:
Hospital de Clínicas, Universidad de Buenos Aires
Resumen:
Objetivo: La versatilidad de Staphylococcus aureus como patógeno se pone de manifiesto en el amplio espectro de enfermedades que provoca. En aquellas infecciones crónicas o persistentes la biopelícula de S. aureus tiene un papel preponderante. El componente más estudiado de la matriz extracelular de la biopelícula es el polisacárido intercelular de adhesión (PIA) o poli-N-acetilglucosamina (PNAG). El locus icaADBC es el responsable de sintetizar PIA, y el regulador sigB controla su expresión junto a otros reguladores como el sistema agr. La molécula efectora del sistema agr es el transcripto denominado RNAIII que codifica además, para la δ-hemolisina. Por ello, la funcionalidad del sistema agr puede establecerse analizando la actividad de la δ-hemolisina. Además, la clasificación de los aislamientos de S. aureus en cuanto a la variabilidad del locus agr, define 4 tipos diferentes y mutuamente inhibitorios de la expresión de ese sistema regulador. La capacidad diferente de formar biopelícula entre los aislamientos clínicos de S. aureus podría ser un reflejo de la expresión de factores de virulencia controlados por agr y sigB, como así también, del bagaje genético de cada cepa. El objetivo de este trabajo fue caracterizar genéticamente aislamientos de S. aureus y correlacionarlo con la capacidad para formar biopelícula. Materiales y Métodos: Los 76 aislamientos de S. aureus obtenidos fueron tipificados bioquímicamente por métodos convencionales. La clonalidad genética de los aislamientos de S. aureus se determinó analizando los perfiles de macrorrestricción con SmaI y posterior electroforesis en campos pulsados. Mediante reacciones de PCR específicas se detectó la presencia de los genes del locus icaABC y sigB. La variabilidad del locus agr se estableció mediante multiplex PCR. La actividad de las hemolisinas α, β y δ se estableció sembrando cada aislamiento perpendicularmente a la cepa RN4220 de S. aureus, la cual únicamente produce β-hemolisina en placas de agar sangre de carnero 5%. La β-hemolisina aumenta la lisis por la δ-hemolisina pero inhibe la lisis por α-hemolisina. La biomasa de biopelícula formada a las 24 h se cuantificó por espectrofotometría luego de ser teñidas con cristal violeta al 0,2%. Resultados: Mediante el cálculo de cuartiles de las medias correspondientes a DOB se distinguieron el 74% (56/76) de los aislamientos como productores de biopelícula (P), de entre los cuales el 32% (18/56) fueron altos productores (AP). Los restantes aislamientos no fueron capaces de formar biopelícula (NP). El total de aislamientos se agruparon en 19 pulsotipos diferentes (tipos y subtipos) según el 85% de similitud. Se observó el predominio del pulsotipo A1 en los aislamientos P y AP (85%: 22/26). Mientras que en el pulsotipo A12 se observó el 61,5% de aislamientos NP. Entre los aislamientos productores de biopelícula, el 89% (50/56) presentaron el sistema agr funcional dado que se observó expresión de la δ-hemolisina. Por otro lado, la mayoría de los aislamientos P y AP presentaron el tipo agr I (42/56). No se halló en este grupo el tipo II de agr, y los agr III (7/56) y agr IV (1/56) se encontraron en bajo número de aislamientos. Todos los aislamientos no productores de biopelícula tenían el sistema agr funcional, cabe destacar que el 10% de los mismos (2/20) fue deficiente para producir α hemólisis y el 5% (1/20) para producir β hemólisis. Este 15% deficiente para alguna hemólisis portaba un agr de tipo I. En más del 50% de los aislamientos con agr-funcional se detectaron el gen sigB y los genes del locus icaABC. Sólo el 6% de los aislamientos resultaron defectivos para sigB y mayormente incapaces de formar biopelícula. Un aislamiento deficiente únicamente de icaA (sigB positivo) resultó ser productor de biopelícula, y otro defectivo para icaC (sigB positivo) no fue capaz de formar biopelícula. El único aislamiento defectivo para icaABC también resultó ser no formador de biopelícula. Conclusión: Los S. aureus provenientes de infecciones persistentes fueron en su mayoría capaces de formar biopelícula (74%) y sus características genéticas fueron: agr de tipo I y funcional, presencia del locus icaABC y del gen sigB. El conjunto de observaciones sugiere que una persistencia prolongada en el huésped podría estar favorecida en aquellos aislamientos de S. aureus con las características mencionadas.