Adquisición y mantenimiento de plásmidos en una cepa competente natural de Escherichia coli aislada de suelo

SOFÍA MUCCI; MAXIMILIANO NARDELLI; CECILIA QUIROGA; DANIELA CENTRÓN

Jornada; XV Jornadas Argentinas de Microbiologia; 2014

Diversas especies bacterianas son capaces de adquirir material exógeno mediante diferentes mecanismos de transformación natural. Poco se sabe sobre las condiciones necesarias para la activación de los genes involucrados en la competencia natural en Escherichia coli. La cepa E .coli 4IgSN1 fue aislada de suelo de un sitio de bajo impacto antrópico del Parque Nacional Iguazú. Resultados previos de nuestro laboratorio evidenciaron que esta bacteria crece a temperaturas entre 37°C y 40°C y es capaz de transformar naturalmente ADN del ambiente. Con el fin de caracterizar la capacidad de esta bacteria de captar y mantener material exógeno, se realizaron ensayos de transformación utilizando plásmidos con diversos orígenes de replicación. Nuestros resultados mostraron que mediante transformación química los plásmidos pCR-aadB (oriR ColE1, KanR) y pACYC184 (oriR 15A, CamR) son captados por E. coli 4IgSN1. Además, se realizaron ensayos para determinar la estabilidad de los plásmidos en la bacteria mediante el crecimiento de colonias transformantes por cultivos seriados y posterior digestión con enzimas de restricción. Estos ensayos reflejaron que ambos plásmidos se mantienen intactos luego de 3 días de crecimiento. Por último, se evaluó la capacidad de esta cepa de adquirir el plásmido pCR-aadB mediante transformación natural luego de la exposición de la bacteria frente a distintas temperaturas (30°C y 37°C) y concentraciones de ADN plásmidico (0.01, 0.1 1 ug/ul). Estos ensayos mostraron que E. coli 4IgSN1 puede captar material exógeno y que este proceso es independiente de las condiciones ensayadas. Nuestros resultados mostraron que E. coli 4IgSN1 es capaz no sólo de captar y mantener plásmidos de diversos grupos de incompatibilidad, si no que puede hacerlo de forma natural, sugiriendo que posee la maquinaria para la captación de ADN exógeno.