Fotosensibilización selectiva de bacterias internalizadas en queratinocitos

MAMONE, L; VALLECORSA P; CALVO, G; DI VENOSA, G; BATTLE, A; TARSIA, F; BUZZOLA FR; CASAS A

Congreso; XV Congreso Internacional de Medicina Interna del Hospital de Clínicas José de San Martín; 2014

La terapia fotodinámica (TFD) es un tratamiento que implica la eliminación de células patógenas a partir de la administración de un compuesto fotosensibilizante (FS) capaz de producir diferentes especies reactivas, luego de ser activado con luz. Esta técnica puede aplicarse en la eliminación de microorganismos involucrados en infecciones. Recientemente, nuestro grupo ha encontrado extractos vegetales con actividad FS sobre bacterias. Nuestro objetivo fue conseguir la eliminación selectiva de las bacterias aplicando TFD empleando como fotosensibilizante un extracto vegetal asilado por nosotros. Establecimos un modelo in vitro de infección bacteriana, utilizando las especies S. epidermidis y S. aureus para infectar una línea de queratinocitos murinos (PAM212) creciendo en monocapa. Luego de infectar, tratamos los queratinocitos con TFD, iluminando con luz visible, y empleando como FSs el extracto vegetal de flor de la especie Solanum verbascifolium y azul de Toluidina (FS de origen sintético de uso clínico). Finalmente evaluamos luego de la TFD, la viabilidad bacteriana por recuento de unidades formadoras de colonias y de los queratinocitos por el ensayo de MTT.  Al emplear el extracto de S. verbascifolium como FS, observamos selectividad del tratamiento por los microorganismos. Luego de 2 hs de iluminación, se obtuvieron reducciones en el recuento de UFC/ml de S. epidermidis y S. aureus superiores al 90%, respecto al control sin irradiar (p<0,05), siendo ambas especies bacterianas más sensibles a la TFD que los queratinocitos (15% de reducción de la viabilidad respecto al control). Por el contrario, al emplear como FS el azul de Toluidina, la viabilidad de los queratinocitos se redujo fuertemente (85% respecto al control en oscuridad), mientras que las UFC/ml se redujeron sólo en un 35%. Se tomó como indicador de selectividad, el índice de bacterias/queratinocito viable. Luego de 2 hs de iluminación en presencia del extracto, este estimador se redujo desde 40 ± 6 (índice inicial) a 2 ± 6  y 6 ± 6 en S. epidermidis y S. aureus, respectivamente.  Mientras que con el azul de Toluidina, el número de bacterias por queratinocito viable se incrementó (115 ± 6 en S. epidermidis y 104 ± 6 en S. aureus). Hemos desarrollado un modelo que nos permite ver la respuesta de la TFD sobre queratinocitos infectados. Los resultados obtenidos con extracto de S. verbasifolium nos llevan a pensar que el/los compuesto/s activo/s del extracto poseen potencialidad en la eliminación selectiva de microorganismos patógenos, con mayor selectividad que el FS referente actual, azul de Toluidina. Esto nos alienta a continuar nuestra investigación con miras al aislamiento del/los componentes fotoactivos de esta planta, y de proyectar la realización de experimentos de TFD in vivo.