Cisteín proteasa B, un inmunógeno de Leishmania braziliensis modulador de la respuesta inmune.

BIVONA AE, SANCHEZ ALBERTI A, CERNY N, CAZORLA SI, MALCHIODI EL

Córdoba

Congreso; LXI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2013

L. braziliensis, la especie causante de Leishmaniasis más abundante en Argentina, expresa una cisteín proteasa B (CPB) que tiene un dominio N-terminal y otro C-Terminal, cuya función es desconocida. Con el objetivo de desarrollar inmunógenos basados en CPB y sus dominios, a partir del gen se clonó la secuencia codificante entera y sus dominios para expresión en células eucariotas y procariotas. Las proteínas recombinantes se purificaron mediante IMAC, confirmándose la identidad mediante western blot frente a sueros leishmaniásicos. Sueros específicos contra CPB entera reconocen los dominios N- y C-terminal. Ratones BALB/c fueron inmunizados en un esquema de prime boost con dos dosis de Salmonella como delivery del ADN codificante de CPB y sus dominios, y dos dosis de las proteínas recombinantes correspondientes, coadyuvadas con ODN-CpG. Encontramos altos títulos de Ac séricos contra CPB entera y sus dominios N- y C-terminal (68000, 62000 y 47000, respectivamente). Estos Ac fueron capaces de disminuir la invasión del parásito a macrófagos de cultivo. Los ratones inmunizados desarrollaron también una respuesta específica de mucosas, con altos títulos de IgA en muestras de lavados intestinales. Por DTH observamos en todos los grupos una fuerte respuesta inmune celular al administrar el Ag correspondiente. Paralelamente, analizamos la capacidad de la CPB y sus dominios de activar distintos receptores de reconocimiento de patrón (RRP) y de modular la presentación antigénica. Encontramos  aumento en la expresión de CMH II y de CD86 en macrófagos peritoneales incubados en presencia de la CPB y del dominio N-term, pero no así con el C-terminal. Similares hallazgos encontramos al medir los niveles de nitritos en los sobrenadantes de cultivos (17.8 µM, 23.8 µM y 7.4 µM para CPB, N y C-Term, respectivamente). Al estudiar la interacción de CPB sobre diferentes RRP, encontramos que los efectos inmunoduladores podrían estar mediados a través de su interacción sobre TLR2.