Efecto de ciprofloxacina en concentraciones subinhibitorias sobre la biopelícula de Staphylococcus aureus

DOTTO, CM; GÁNDARA, L; ALVAREZ, LP; CASAS, A; BUZZOLA, FR

Congreso; VII Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínicas; 2012

Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínicas

a) Objetivos: La exposición de Staphylococcus aureus a concentraciones subinhibitorias (subCIM) de ciertos antibióticos gatilla en este patógeno cambios en la expresión de algunos factores de virulencia. En este contexto, el objetivo del presente trabajo es estudiar el efecto que la ciprofloxacina (CPX) en subCIM tiene sobre la formación de biopelícula y patrón transcripcional de genes regulatorios (RNAIII, sae) y de virulencia (sdrC, icaA, icaR). b) Materiales y Métodos: Se utilizaron las siguientes cepas de S. aureus: Newman (SAMS), HU71 (SAMR) y Mu50 (VISA). Para cada una de las cepas, se determinó la CIM a CPX en medio líquido siguiendo la metodología estándar. La formación de biopelícula se realizó en microplacas y se cuantificó midiendo la DO595 luego de la fijación y tinción con cristial violeta. Se determinó el nivel de transcriptos luego de la extracción del ARN total de las biopelículas y posterior PCR en tiempo real (qRT-PCR) con los cebadores específicos. c) Resultados: La formación de biopelícula aumentó luego de tratar a la cepa SAMS a subCIM de CPX (DO: 2.52 ± 0.1 vs 3.41 ± 0.17, p ≤ 0.01). Por el contrario, luego de la exposición a subCIM de CPX se observó una reducción significativa de la biopelícula de la cepa VISA (DO: 2.46 ± 0.11 vs 1.98 ± 0.12 , p ≤ 0.05). Sin embargo, no se determinaron cambios para la biopelícula de la cepa SAMR en presencia de subCIM de CPX (DO: 2.81 ± 0.12 vs 2.93 ± 0.19). Previamente, se estableció para la cepa SAMS que el incremento de biopelícula inducido por subCIM de CPX sería por un mecanismo ica-independiente. En el presente trabajo, se observó niveles muy superiores del transcripto icaR (2(-ddCT): 4.54) (represor los locus ica) en la biopelícula formada en presencia de subCIM de CPX y niveles similares de ARNm para icaA (2(-ddCT): 1.16). Interesantemente, el nivel del transcripto sdrC (adhesina) se halló muy incrementado (2(-ddCT): 28.34) en la biopelícula formada en presencia de subCIM de CPX. Además, los transcriptos de los reguladores RNAIII (2(-ddCT): 1.88) y sae (2(-ddCT): 3.82) se observaron elevados por el tratamiento con CPX. d) Conclusiones: Concentraciones subinhibitorias de ciprofloxacina tienen efectos diferentes sobre la formación de la biopelícula de S. aureus. Probablemente estas diferencias sean específicas de las cepas bacterianas. El incremento de biopelícula de la cepa SAMS sería un reflejo de cambios en el nivel de ARNm de genes reguladores y de virulencia.