IMPAM   23988
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES EN MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA MEDICA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
La integrasa INTI1 es capaz de movilizar al cassette inusual blages-1, encontrado en integrones de clase 1
Autor/es:
QUIROGA MARÍA PAULA; GALÁN ANGÉLICA VIVIANA; FONSECA ÉRICA L; VICENTE ANA CAROLINA; CENTRÓN DANIELA
Lugar:
C,A,B,A,
Reunión:
Congreso; VII Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínicas; 2012
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
Objetivo: Los integrones de clase 1 son elementos genéticos que contienen los componentes de un sistema de recombinación sitio específico y generalmente están asociados a multirresistencia antibiótica en aislamientos clínicos. Están compuestos por el gen intI1 que codifica la recombinasa IntI1, el sitio de recombinación attI1 y un promotor Pc que permite la expresión de los cassettes. Los cassettes, a su vez, consisten de un marco de lectura abierto y un sitio de recombinación attC, que es reconocido por la integrasa para escindir del integrón al cassette e insertarlo en el sitio attI1 o en otro sitio attC. En un aislamiento de Pseudomonas aeruginosa sensible sólo a colistin se encontró un integrón de clase 1 que contiene los cassettesorf126-blaGES-1-aac(6?)-IId. El cassette inusual blaGES-1 codifica la enzima GES1 que confiere resistencia extendida a β-lactámicos. Este cassette tiene la particularidad que río abajo del gen blaGES-1 presenta una secuencia de 13 nucleótidos con 100% de identidad con el sitio attI1 en lugar de poseer un sitio attC típico. El objetivo de este estudio fue determinar si la integrasa de tipo 1 (IntI1) era capaz de escindir al cassette inusual blaGES-1 e insertarlo en un sitio attI1. Material y método: Realizamos ensayos de recombinación in vivo en la cepa E. coli TOP10, siguiendo la metodología descripta por Gravel y col. 1998. Utilizamos plásmidos recombinantes construidos para tal fin a partir del aislamiento clínico de Pseudomonas aeruginosa PS1 y determinamos las frecuencias de recombinación realizando PCRs con cebadores específicos. Resultados: Observamos que INTI1 provista en trans era capaz de escindir al cassette inusual blaGES-1 e insertarlo en un sitio attI1 de forma eficiente. Los sitios de escisión e inserción fueron verificados por secuenciación de los amplicones correspondientes, evidenciando eventos de recombinación sitio-específica. Conclusiones: A partir de los resultados de los ensayos de recombinación in vivo demostramos la completa funcionalidad del cassette inusual blaGES-1 y confirmamos que un cassette inusual de este tipo puede ser utilizado por IntI1 como sustrato para mediar su escisión e inserción en un sitio attI1 lo cual pone en evidencia la plasticidad del sistema de recombinación mediado por la integrasa de tipo 1.