Caracterizacion genotipica de la resistencia a macrolidos en N. Gonorrhoeae

GARCÍA SUSANA; QUIROGA MARÍA PAULA; PERAZZI B; DE MIER C; VAY C; FAMIGLIETI A; DANIELA CENTRÓN

C,A,B,A,

Congreso; VII Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínicas; 2012

Sociedad Argentina de Microbiología

Introducción: En los últimos años se incrementó la frecuencia de aislamientos de  N. gonorrhoeae con resistencia de bajo y alto nivel a macrólidos y azálidos. Esto tiene impacto clínico, especialmente en la coinfección con Chlamydia trachomatis que suele ser tratada con azitromicina. Objetivo: Determinar los genotipos de resistencia a macrólidos de N. gonorrhoeae aisladas en el período 2005-2008. Materiales y métodos: Se estudiaron los aislamientos  resistentes a eritromicina (CIM ≥2 µg/ml), rango 2-256 µg/ml. Se determinó la CIM de Tritón X-100 para caracterizar el fenotipo Mtr (CIM> 2000 µg/ml). Sobre esos aislamientos se realizó la extracción de DNA con fenol-cloroformo. En 17 muestras de DNA genómico se amplificó el gen mtrR y su promotor, utilizando los cebadores de Lucas (1997). Se realizó la separación electroforética de los productos de PCR en agarosa 1%. Posteriormente se secuenció y se realizó el análisis del cromatograma y se procedió al alineamiento con la secuencia de referencia de N. gonorrhoeae FA 19 Nº ?accesión?: NZ_ABJ01000098.1 con el programa BLAST-n (ncbi). Se  investigó la presencia de los genes: mefA, ereA, ermB, ermC, ermF y ermTR, mediante PCR utilizando cebadores específicos y posterior corrida electroforética en gel de garosa 1% frente a un patrón de PM de 1 kb y controles positivos. Todos los geles se  colorearon con Bromuro de etidio y se observaron  al UV.  Resultados: Se estudiaron 21 aislamientos de N. gonorrhoeae resistentes a macrólidos. No se hallaron genes que codifican para metilasa: ermB, ermC, ermF, ermTR ni eflujo mefA, ni el gen codificante de esterasa ereA. En 14 secuencias se detectó una deleción de adenina en la región repetida invertida de 13 pb del promotor, esta mutación se asocia a sobreexpresión del sistema de eflujo MtrCDE , otra mutación fue la transversión C→G en la región -35 del promotor . en 12 secuencias se detectaron mutaciones en la región codificante de mtrR: His105Tyr y Gly45Asp en dos aislamientos, también asociadas a sobreexpresión de la bomba MtrCDE y consiguiente resistencia a macrólidos. En 2 aislamientos con CIM de eritromicina de 16 y 4 µg/ml, las mutaciones halladas no explicarían por si solas ese nivel de resistencia, probablemente se deba a mutaciones en la peptidil- transferasa del 23S ARNr. Conclusiones: El mecanismo de resistencia a macrólidos más frecuente en N. gonorrhoeae es la sobre-expresión del sistema de eflujo MtrR, y los genotipos hallados son los ya descriptos.