Aplicación de métodos fenotípicos y genotípicos en la identificación de Achromobacter spp.: utilización de una nueva variante de enzima de tipo OXA como marcador de especie

PAPALIA M., ; ALMUZARA M., ; TRAGLIA G., ; RAMÍREZ MS., ; FAMIGLIETTI A.,; VAY C., ; GUTKIND G., ; RADICE M

Buenos Aires

Congreso; VII Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínicas SADEBAC; 2012

INTRODUCCIÓN Las bacterias del género Achromobacter están ampliamente distribuidas en la naturaleza. Así mismo, son causantes de numerosas infecciones en pacientes inmunocomprometidos y en aquellos con enfermedades respiratorias crónicas. OBJETIVO Caracterizar 5 aislamientos de Achromobacter spp. recuperados de pacientes fibroquísticos que presentaban resistencia a ceftacidima y/o imipenem.  METODOLOGIA Y RESULTADOS Se llevó a cabo la identificación de los aislamientos por pruebas bioquímicas convencionales. Los resultados, si bien no fueron concluyentes, sugirieron que estos aislamientos podrían corresponder a Achromobacter ruhlandii. El perfil de proteínas totales resuelto por SDS-PAGE, incluyendo aislamientos previamente identificados como Achromobacter xylosoxidans, mostró que los 5 aislamientos en estudio presentaban idéntico patrón de bandas proteícas entre sí  y a su vez, diferente al observado en A. xylosoxidans. A pesar que la identificación por secuenciación del ADN-ARNr16S ha sido descripta para numerosas especies de bacilos gram-negativos no fermentadores, este método no resultó de utilidad en el presente estudio ya que no permitió discriminar entre las distintas especies de Achromobacter. La detección del gen codificante de la enzima  OXA-114, ubicua de A. xylososidans, se realizó por amplificación por PCR utilizando los oligonucleótidos descriptos por Turton et al, 2011. Si bien inicialmente se obtuvieron amplicones del tamaño esperado, las secuencias nucleotídicas de los fragmentos amplificados presentaron entre 56-58 sustituciones nucleotídicas respecto de blaoxa-114 (aproximadamente 90 % de identidad). Dichos cambios se traducen en 15 sustituciones aminoacídicas en OXA 114, correspondiendo a una nueva variante de enzima de tipo OXA (EMBL HE614014.1). Esta variante no estuvo presente en ningún aislamiento de A. xylosoxidans. Las secuencias correspondientes a las enzimas tipo OXA encontradas en los aislamientos de A ruhlandii analizados presentaron entre sí un 99% de identidad. CONCLUSION La identificación de las distintas especies de Achromobacter resulta dificultosa y requeriría del abordaje de ensayos fenotípicos y genotípicos. En este sentido, la detección de enzimas especie específicas constituiría una herramienta útil en la identificación. Si bien sería necesario ampliar el estudio incluyendo más aislamientos de A. ruhlandii y de otras especies de Achromobacter, es posible inferir que esta nueva variante de OXA sería ubicua de dicha especie. Además sería de importancia clínica determinar si dicha enzima aporta niveles significativos de resistencia a esta especie bacteriana.