IBIMOL   23987
INSTITUTO DE BIOQUIMICA Y MEDICINA MOLECULAR PROFESOR ALBERTO BOVERIS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Tráfico de nnos a mitocondria en el estrés celular por deprivación de factores tróficos.
Autor/es:
PEREZ, E; ALIPPE, Y; PAGNINI C; CARRERAS, MC; PODEROSO, J J.
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LVReunión Científica Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2010
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
La inhibición de la proliferación por deprivación de factores tróficos conduce al arresto o a la muerte celular. Considerando el rol de las mitocondrias en las vías de señalización en los procesos de proliferación y apoptosis, del NO en la modulación de citocromo oxidasa y la presencia de nNOS en mitocondrias (mtNOS), estudiamos la expresión de nNOS en relación al contenido matricial de NO en células NIH/3T3 durante la deprivación de factores tróficos. La hipótesis general es que la mtNOS, a través de la producción de NO y H2O2, modula vías de señalización que culminan en el arresto celular y la diferenciación. El objetivo es demostrar la correlación entre la actividad de mtNOS y el arresto del ciclo celular vía Sirt3. Para ello, las células fueron deprivadas de suero durante 0-72h. Desde las 24 h se observó un fuerte arresto y niveles mínimos de apoptosis (≤5%; p<0,05), detectados por citometría de flujo y conteo celular. El arresto en G1 fue parcialmente revertido (50%) con L-NAME 2 mM. Luego de 24 h de deprivación, la expresión de nNOS a nivel de mRNA y proteína comenzó a incrementarse (RT-PCR: 4 veces el control a 24 h; WB: 10 veces el control a 48 h). A las 48-72h, el incremento de nNOS fue seguido de su translocación a mitocondria, demostrado por su relativa disminución en citosol e incremento proporcional en las organelas. La citometría de flujo en células enteras y mitocondrias aisladas con DAF-FM demostró elevados niveles de NO (+50% a 48 hs), confirmado por microscopía confocal y asociado a disminución del consumo de oxígeno por inhibición de COX (-50% a 48 hs) y significativa liberación mitocondrial de H2O2. Finalmente, la expresión de Sirt3 se incrementó con la deprivación, alcanzando un pico a las 24-48 h. Los resultados sugieren que el incremento transcripcional de la nNOS y su translocación a mitocondria con producción de H2O2 inicia vías de señalización a través de Sirt3 que conducen al arresto de células NIH/3T3 durante la deprivación de suero