Sepsis, iNOS y dinámica mitocondrial hepática en la rata.

ELGUERO E, GONZÁLEZ A, KERSTING S, PAVOLOTSKI C, PERALTA JG, CARRERAS MC, PODEROSO JJ

Buenos Aires- Mar del Plata

Congreso; LV Reunión Científica Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2010

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

En resultados previos se demostró daño mitocondrial en la endotoxemia experimental por LPS y en                          ligadura cecal (LCP) en ratas asociado con inducción de iNOS y alteraciones hepáticas. El interés de este trabajo radica en dilucidar los efectos deletéreos intramitocondriales en ambos modelos y si el importe de iNOS favorece a los mismos. Confirmamos que inoculación de 10 mg de LPS produce translocación de iNOS a mitocondrias in vivo 4-6 hs post-tratamiento. Experimentos de transcripción-traducción in vitro (TTI) con cDNA de iNOS marcado con v5 e importe en mitocondrias preincubadas con citosol de hígado de rata control demostraron escaso importe de iNOS recombinante. Sin embargo, la preincubación con citosol séptico, determinó un significativo aumento del importe de iNOS (0.06 ± 0.04 vs 0.75± 0.14; p<0.036); la fosforilación de iNOS por Src recombinante produjo un importe superior al observado con citosol control. Asumiendo que citosol séptico contiene numerosos mediadores inflamatorios, se estudió la regulación transcripcional (qPCR) de GTPasas que actúan sobre fisión (Drp-1) y fusión mitocondrial (Mtf-2). Se observó una disminución significativa del mRNA para Mtf-2 en ambos modelos con una disminución acentuada a las 4-6 hs en LPS y 12-18 hs en LCP, sin modulación proporcional de Drp-1. Estos cambios se acompañaron de aumento significativo de fisión (alteración de la morfología tubular mitocondrial) mediante análisis por microscopía electrónica a las 6hs de LPS (control: 65 ± 1  vs. LPS: 30 ± 7 mitocondrias tubulares/ U área, p<0.008) y 12hs de LCP (control: 65 ± 1 vs LCP: 9 ± 2 mitocondrias tubulares/ U área, p<0.000). Se concluye que a) factores presentes en el citosol séptico o fosforilación de iNOS por Src favorecen su importe, b) iNOS es importada en el período crítico de fisión consecuente a disminución de RNAm de proteínas de fusión; c) la disfunción mitocondrial séptica por fisión produce lesión secuencial del hígado como parte del síndrome multiorgánico.