IBIMOL   23987
INSTITUTO DE BIOQUIMICA Y MEDICINA MOLECULAR PROFESOR ALBERTO BOVERIS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
erk en mitocondrias: activación tricompartimental en células lp07
Autor/es:
ALIPPE Y; ELGUERO E; PÉREZ, H; CARRERAS MC; PODEROSO JJ
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LV Reunión Científica Sociedad Argentina de Investigación Clinica; 2010
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clinica
Resumen:
 Previamente demostramos que la oxidación de MAPKs en mitocondria determina la interacción                        diferencial con sus activadores, provocando activación redox selectiva de las vías de señalización celular; ERK2 es fosforilada por MEK1/2 en Tyr185 y Thr183, y la translocación al núcleo depende de su pasaje previo por mitocondria. La hipótesis general es que la activación de ERK2 es regulada espacial y temporalmente por fosforilación secuencial de sus sitios de activación en los compartimientos citosólico y mitocondrial. El objetivo es observar la redistribución subcelular y fosforilación secuencial de ERK2 en condiciones proliferativas (H2O2 1µM) y antiproliferativas (H2O2 50µM) en células LP07. Mediante anticuerpos contra las distintas formas fosforiladas de ERK se observó que con H2O2 1µM, pY-ERK se incrementó 60% en citosol (15 min) y luego disminuyó a niveles control, mientras que en mitocondrias aumentó 50% (5 min) y permaneció constante. El tratamiento con H2O2 50µM disminuyó los niveles citosólicos de pY-ERK, en consonancia con un incremento leve y sostenido en mitocondria. Se observó poca variación de pT-ERK en citosol con 1µM, y un pico en mitocondria a los 30 min (8 veces el control) que luego revirtió; con 50µM pT-ERK en mitocondria aumentó 10 veces (5 min) cayendo luego 50% (30 min), mientras que hubo poca variación citosólica. Por mutagénesis dirigida se generaron variantes no fosforilables de ERK2 en Tyr (Y185A) o Thr (T185A) y se analizó su distribución con 1µM de H2O2. T183A se acumuló en citosol, con pico a los 15 min (+25%) al tiempo que cayó en mitocondria (-50%), mientras que Y185A permaneció invariable en citosol y aumentó tardíamente en mitocondria (+10%, 30 min). Estos resultados apoyan un modelo tri-compartimental de activación de ERK2, donde la entrada a mitocondria depende de la fosforilación citosólica en Tyr185, mientras que la fosforilación en Thr183 en la organela y posterior translocación al núcleo obedece al estado redox.