Factor de necrosis tumoral alfa y óxido nítrico aumentado en hígado de rata diabéticas inducidas por estreptozotocina. Efecto del tratamiento con insulina.

INGARAMO PI; RONCO MT; FRANCÉS D; GALLEANO M; MONTI J; CARRILLO M; CARNOVALE C

Buenos Aires, Argentina

Congreso; XVI Congreso Argentino de Diabetes; 2008

Sociedad Argentina de Diabetes

Introducción: en diabetes mellitus se ha observado un aumento plasmático de citoquinas pro-inflamatorias, como el factor de necrosis tumoral alfa (TNFa), el cual se une al receptor de membrana celular TNF-R1 pudiendo inducir al factor de transcripción NFkB capaz de activar genes pro-inflamatorios como el de la enzima óxido nítrico sintasa inducible (NOS2). No existen estudios sobre la producción y efectos hepáticos de la citoquina en el estado diabético. Objetivo: determinar en el hígado de ratas diabéticas el nivel de TNFa, la expresión de NOS2 y la consecuente producción de óxido nítrico (NO). Evaluar el efecto del tratamiento con insulina sobre dichas variables. Métodos: en el presente trabajo se utilizaron ratas Wistar macho de 90 días. Se dividieron en 3 grupos: control  (C ), diabéticos (D) y diabético tratado con insulina (D+I). La diabetes se indujo por una única inyección intraperitoneal (ip) de la droga diabetogénica estreptozotocina (SZ) en una dosis de 60 mg/kg de peso corporal (pc) disuelta en buffer citrato pH= 4,5. Al grupo C se le inyectó el buffer. A los 15 días post-SZ , el grupo D+I fue inyectado vía subcutánea con Insulina (30 UI/kg pc por día durante 15 días). 30 días post  inyección de la SZ, se anestesiaron con pentobarbital sódico (50 mg/kg pc) por vía ip, se les extrajo sangre por punción cardíaca y el hígado fue extraído y procesado para las determinaciones de NO, NOS2, TNFa y TNF-R1. Resultados: se expresan como media  ± error estándar. Glucemia (método enzimático- colorimétrico GOD-POD, g/l): C: 1,17 ± 0,01; D: 4,67 ± 0,42*; D+I: 0,85 ± 0,01 #. Peso corporal (g): 439,2 ± 8,5; D: 297,2 ± 9,5* ; D+I: 421,4 ± 13,3 # . NO en sangre (Resonancia paramagnética electrónica, EPR, unidades arbitrarias UA). C: no detectable; D: 22026 ±  2571*; D+I no detectable#  . Contenido de NO en homogeneizado total de hígado (EPR,UA) C:49305 ± 21384; D: 199877 ±  67838*; D+I: 37238 ± 6460#. Por western blott, expresado como porcentaje del control (C 100%): Expresión de NOS2 en citosol hepático: D: 534,9 ± 257,4*; D+I 166,39 ± 55,6#. Expresión de TNFa en lisado hepático: D: 249,9 ± 112,3* ; D+I: 94,09 ± 34,58#. Expresión de TNF-R1 en membrana plasmática hepática: D: 203,2  ± 119*;  D+I: 47,8 ± 10,9 *#. * p<0,05 vs. C.  #p<0,05 vs. D. Conclusiones: en el estado diabético observamos un aumento en la producción de TNFa hepático que induce a un aumento en la expresión del TNF-R1 en la membrana celular. La unión de la citoquina a su receptor condujo al aumento de la generación de NO hepático por la inducción de la OS2. El tratamiento con insulina revirtió  la respuesta, produciendo una disminución en la producción del TNFa en hígado con la consecuente inhibición de las vías que conducen a la producción de NO.