Uso de una sonda de espín para el estudio de la interacción de espermatozoides con lipidos

ORREGO MT; HUALA JM; MONTENEGRO BRUSOTTI J.; CIMATO A; CISALE H.; PIEHL L. L.

Buenos Aires

Jornada; IV Jornadas Internacionales del Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal - INITRA; 2014

INITRA. Facultad de Ciencias Veterinarias, UBA

El colesterol es una molécula clave tanto en la capacitación espermática como en la criocapacitación. Entre las distintas especies de mamíferos, los espermatozoides de cerdo son los que presentan la más baja relación colesterol/fosfolípidos (0,26) en su membrana, siendo los más susceptibles a la criocapacitación. Los protocolos de criopreservación incluyen entre sus aditivos la incorporación de yema de huevo como fuente de lípidos.El objetivo del presente trabajo fue estudiar la posible incorporación de colesterol a los espermatozoides desde la yema de huevo o desde liposomas con distinto contenido de colesterol.La sonda de espín 3-doxil-5-colestano, un análogo de colesterol, fue incorporada a: 1) yema de huevo al 20 % (Y20) en lactosa 11% con y sin el agregado de glicerol 3% Equex-Paste 0,5 % (GEQ), 2) fracción soluble de Y20 obtenida por centrifugación (10000 g, 30 min) con y sin el agregado de GEQ, 3) liposomas de lípidos extraídos de Y20, 4) liposomas de lípidos comerciales con alto contenido de colesterol. Las muestras de espermatozoides, diluidas en diluyente Androstar® Plus, fueron estabilizadas a 17ºC durante 2 h, y el pellet, obtenido por centrifugación (2000 g, 5 min) fue resuspendido a cc=1,5 x109 Z/ml en las preparaciones anteriores. La temperatura de las muestras fue disminuida de 17 ºC a 5ºC en un intervalo de 2 h, y la presencia la sonda en los espermatozoides fue evaluada mediante espectroscopía de Resonancia de Espín Electrónico (ESR). Además, la fluidez de membrana de los espermatozoides sometidos a los distintos tratamientos fue determinada mediante ESR.En los espermatozoides co-incubados con ambos tipos de liposomas, se detectó la presencia de la sonda 3-doxil-5-colestano y cambios en la fluidez de membrana, mientras que en los espermatozoides incubados con yema de huevo completa o su fracción soluble, tanto en ausencia como en presencia de GEQ, no se observó la incorporación de la sonda ni modificación de la fluidez de membrana de los espermatozoides.Estos resultados indicarían que los espermatozoides de cerdo no incorporan colesterol desde la yema de huevo, y que, estas células interaccionan con los lípidos cuando se encuentran en forma de liposomas.