Generación y Efecto de Especies Activas del Nitrógeno en Cloroplastos

SEBASTIÁN JASID; SUSANA PUNTARULO; MARCELA SIMONTACCHI

Chascomús, Buenos Aires, Argentina

Congreso; XXVI Reunión de la Asociación Argentina de Fisiología Vegetal; 2006

Asociacion Argentina de Fisiologia Vegetal

El objetivo del presente trabajo fue caracterizar la generación de óxido nítrico (NO) por cloroplastos de soja (Glycine max, var ADM 4800). Se ha postulado que las plantas generan NO a partir de L-arginina en reacciones catalizadas por enzimas, además se describió una posible generación de NO dependiente de nitrito (NO2-), que puede ser enzimática, catalizada por nitrato reductasa (NR) o no-enzimática en compartimentos celulares de bajo pH. Dado que se trata de un radical libre la generación de NO por cloroplastos aislados fue estudiada empleando resonancia paramagnética electrónica con spin trapping. Cloroplastos de soja incubados en presencia de NaNO2 1 mM presentaron una velocidad de generación de 3,2±0,2 nmol NO min-1 mg-1 proteína, mientras que el agregado de DCMU disminuyó la síntesis en un 62%. La incubación en presencia de L-arg 1 mM y NADPH 0,1 mM resultó en una generación de 0,76±0,04 nmol NO min-1 mg-1 proteína, la cual fue parcialmente inhibida en presencia de análogos de L-arg (L-NAME y L-NNA). Los cloroplastos fueron expuestos in vitro a un dador de NO (nitrosoglutatión), la liberación de NO por el dador se caracterizó utilizando un electrodo selectivo. La exposición a 3 mM de NO durante 30 min condujo a una disminución en el contenido de radicales lipídicos de las membranas (34%) y a una disminución en el contenido de carbonilos proteicos (10%), respecto de los controles. La reacción entre NO y anión superóxido (O2-), lleva a la formación de peroxinitrito (ONOO-). La incubación en presencia de 25 mM ONOO- condujo a un incremento tanto en el contenido de radicales lipídicos (34%) como de los grupos carbonilos proteicos (20%), respecto de los controles. Los resultados presentados sugieren que el NO es un metabolito endógeno en los cloroplastos de soja y que las especies reactivas del nitrógeno pueden ejercer tanto efectos antioxidantes como pro-oxidantes, según se trate de NO o ONOO-, sobre las macromoléculas del cloroplasto. Financiado por CONICET, ANPCyT (11187) y Universidad de Buenos Aires (B017 y B012).