NO y óxido nítrico sintasa mitocondrial en corazón de rata

BOMBICINO SS; VALDEZ LB; ZAOBORNYJ T; BOVERIS A

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica y LIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2006

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

El NO ejerce dos efectos principales sobre la cadena respiratoria: inhibe la citocromo oxidasa, competitivamente con el O2; e inhibe la tranferencia de electrones entre los cit. b y c, incrementando la producción de O2- y H2O2. El objetivo de este trabajo es caracterizar la producción mitocondrial de NO en cardiomiocitos y también la actividad y expresión de la mtNOS. Se determinó la producción de NO espectrofotométricamente, en cortes de corazón, en mitocondrias y en membranas mitocondriales. La expresión de mtNOS se analizó por Western blot y la actividad funcional a través del consumo de O2 (electrodo de Clark) y de la producción de H2O2 (fluorometricamente). Mitocondrias de corazón de rata liberan NO a velocidades que dependen del estado metabólico: en estado 3 es 50% menor que en estado 4. Membranas mitocondriales de corazón producen NO a una velocidad de 2.19 ± 0.04 nmol/min.mg prot. La actividad de mtNOS depende exponencialmente del potencial de membrana mitocondrial, siendo mas importante a valores fisiologicos de Dy. La mtNOS de cardiomiocitos fue detectada utilizando anticuerpos anti-iNOS, mientras que la fracción post-mitocondrial reaccionó con anticuerpos anti-eNOS. Mitocondrias de corazón suplementadas con L-arg disminuyen 15% el consumo de O2, mientras que el agregado de L-NAME lo incrementa (10%). La preincubación de cortes de corazón con L-arg disminuyó 35% el consumo de O2, mientras que el agregado de L-NAME lo aumentó (20%). El agregado de L-arg aumentó la produccion de H2O2 (30%) y la suplementacion con L-NAME la disminuyo (10%). Estos efectos son explicados por la acción del NO sobre las actividades de citocromo oxidasa y ubiquinol-succinato-citocromo c reductasa. La producción de NO por mitocondrias de corazón corresponde al 60% de la producción total de NO por el cardiomiocito, indicando un papel relevante del NO mitocondrial y de la mtNOS en procesos fisiopatológicos cardíacos.