Encapsulación del péptido antimicrobiano AP7121 para su administración por vía oral.

GARCIA C; DELPECH G; CECI M; LISSARRAGUE S; SPARO M

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; Congreso Nacional de Ciencia Reguladora de ANMAT; 2019

Administración Nacional de Medicamentos, Alimentos y Tecnología Médica (ANMAT)

El péptido antimicrobiano AP7121 (AP), producido por Enterococcus faecalis CECT7121, presenta actividad bactericida sobre patógenos Gram positivos de animales para consumo, mascotas y humanos (Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, entre otros). Aunque no presenta toxicidad, la vía de administración oral está inhibida por la acidez gástrica y enzimas proteolíticas digestivas. Objetivo Investigar la eficacia de la encapsulación de AP para su administración por vía oral. Materiales y Métodos: Encapsulación: por formación de gotas de alginato de sodio estéril 2,2% conteniendo AP (30,0 mg/L, concentración final) y circulando en dispositivo extrusor. Las gotas se derramaron sobre un baño con CaCl2 0,1M que indujo la gelificación (25-30 min). Las cápsulas se colaron y lavaron con H2O destilada estéril. Tamaño de cápsulas: medición con calibrador. Evaluación de actividad inhibitoria: en cápsulas y solución de CaCl2, mediante Concentración Inhibitoria Mínima de AP (CIMAP), con L. monocytogenes ATCC 19111 (LM, CIMAP: 0,8 mg/L). Concentración de AP: en cápsula y solución de CaCl2 por método de Bradford. Estabilidad frente a enzimas proteolíticas: tripsina, α-quimotripsina, proteinasa K, pronasa E. Se mezclaron 0,5 mL de cada enzima (1 mg/mL) con n=10 cápsulas, incubando 1h, 37ºC. Actividad residual: mediante CIMAP con LM. Influencia del pH: n=10 cápsulas, sumergidas (1, 2, 4 h, 37ºC) en solución de HCl, pH=2,5. Para los estudios del AP encapsulado se disolvió 1,0 g de cápsulas en 9,0 mL de buffer fosfato 0,2 M hasta disolución. Los experimentos se realizaron tres veces por duplicado. ResultadosLas cápsulas obtenidas fueron uniformes (0,4±0,01 mm) y se obtuvo un concentración final de AP: 29,7±0,3 mg/L con una CIMAP: 0,8 mg/L para LM. En la solución de CaCl2 residual las proteínas no fueron dosables y no se detectó actividad inhibitoria sobre LM. Frente a enzimas proteolíticas, no se observó descenso de actividad, permaneciendo inalterable en las cápsulas (CIMAP de LM: 0,8 mg/L). Luego de la exposición a pH=2,5 a 1, 2 y 4 h, solo se observó pérdida significativa de actividad a las 4 h de exposición. CIMAP de LM para 1h: 0,8 mg/L; 2 h: 0,8 mg/L; 4 h: ≥16 mg/L. Conclusión: Los resultados obtenidos habilitan la utilización de AP en cápsulas para su administración por vía oral, dada su resistencia al pH ácido estomacal y enzimas proteolíticas, factores limitantes para su uso sin protección de su actividad.