Evaluación de la expresión y producción de stx2a y de la inducción de profagos Stx en distintos entornos bacterianos

KRÜGER A; LUCCHESI PMA; BURGÁN J

Quilmes

Jornada; Primeras Jornadas Latinoamericanas de Bacteriófagos; 2019

Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) es agente causal de diarreas y síndrome urémico hemolítico (SUH) en humanos. El principal mecanismo de patogenicidad de estas bacterias es la producción de toxina Shiga (Stx). Diversos subtipos de Stx han sido descriptos y Stx2a es el asociado con mayor frecuencia a casos de SUH. Los genes que codifican para estas toxinas son portados por fagos temperados muy diversos que influyen en el control de la expresión y liberación de las Stx. Estos fagos también desarrollan un importante papel en la propagación y transferencia de genes de virulencia y en la formación de cepas patógenas emergentes.En este trabajo se propuso: evaluar la capacidad infectiva de fagos Stx2a de Argentina sobre distintas cepas E. coli, generar nuevos lisógenos y comparar los niveles de expresión de stx 2a y la producción de fagos y Stx de los lisógenos obtenidos con los de sus correspondiente cepas STEC wild type. Las comparaciones se realizaron en 2 condiciones: basal e inducida con mitomicina C.Para la generación de los lisógenos se utilizaron 6 fagos Stx2a provenientes de cepas STEC de diferentes serotipos: O26:H11 (2), O145:H- (2) y O157:H7 (2). Con cada uno de estos fagos se infectaron 2 cepas derivadas de E. coli K-12: E. coli HB101 y E. coli Y1090. La detección de las bacterias que incorporaron el profago se llevó a cabo por PCR. Para la comparación con las correspondientes cepas wild type: a) se analizó la expresión de stx 2a por qPCR; b) se valoró mediante un ELISA la producción de Stx en sobrenadantes de cultivos puros y diluidos; y c) se evaluaron los niveles de producción de fagos con ensayos de doble placa de agar. Los 6 fagos fueron infectivos frente a las 2 cepas hospedadoras. Solo dos lisógenos se mantuvieron estables luego de 3 repiques: uno obtenido con un fago proveniente de una cepa O145:H- y el otro de una O157:H7, ambos sobre E. coli Y1090. En los dos lisógenos se detectó expresión de stx 2a , tanto en condiciones basales como inducidas, y los niveles estuvieron en el mismo orden de magnitud que los observados en sus correspondientes cepas wild type. Por el método en doble capa de agar, los dos lisógenos produjeron placas de lisis y se observó un aumento en los niveles de fagos producidos con mitomicina C con respecto a los niveles sin inductor. En cada uno de los lisógenos y para las dos condiciones, la producción de fagos fue mayor a la observada en su correspondientes cepas wild type. En cuanto a la cantidad de Stx producida, el ELISA reveló que el nivel de Stx en los sobrenadantes, tanto puros como diluidos, de los dos lisógenos era igual o ligeramente menor a la presente en los sobrenadantes de sus correspondientes cepas wild type. Si bien los resultados sugieren dificultad para obtener lisógenos estables de fagos Stx, se logró evaluar y determinar similar comportamiento de dos fagos en distintos entornos bacterianos, tanto en condiciones basales como inducidas con mitomicina C.