CIVETAN   23983
CENTRO DE INVESTIGACION VETERINARIA DE TANDIL
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Influencia del Locus de Adherencia y Autoagregación (LAA) de cepas STEC en la adherencia a células Hep-2
Autor/es:
NIETO FARÍAS, MARÍA VICTORIA; VÉLEZ MARÍA VICTORIA; ETCHEVERRÍA ANALÍA INÉS ; COLELLO ROCÍO; PADOLA NORA LÍA
Reunión:
Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología; 2019
Resumen:
Introducción y Objetivos: Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) es considerado un patógenoemergente transmitido por alimentos asociado a colitis hemorrágica (CH) y Síndrome Urémico Hemolítico(SUH). Dentro de STEC existe un grupo que coloniza y lesiona la mucosa intestinal debido a una isla depatogenicidad llamada Locus de borrado del enterocito (LEE). A partir de la presencia o ausencia de este locusse podría realizar una clasificación de STEC en LEE-positivas o LEE-negativas. Las cepas LEE-negativas noposeen los genes necesarios para producir lesión. Sin el locus LEE, las cepas deben adherirse al epiteliointestinal por otros mecanismos. Se ha determinado la existencia de una isla de patogenicidad denominada LAAque en ausencia de LEE, codifica genes que participan en la adhesión y autoagregación. Su marcador es el genhes, que se encuentra en uno de los cuatro módulos que la componen y participaría en los mecanismos depatogenicidad. El objetivo de este trabajo fue estudiar la adherencia de cepas STEC LAA-positivas a la líneacelular HEp-2.Materiales y Métodos: Se trabajó con un total de 16 cepas STEC O91 de la cuales 14 fueron autóctonas LAApositivas y dos mutantes, una O91 con la deleción de LAA y una HB101 con la inserción de un plásmidorecombinante con el gen hes (HB101pvbhes). Cada cepa se incubó en caldo Luria Bertani (LB) (18 h, 37°C). Setrabajó con la línea celular HEp-2. Las células se cultivaron en placas de 24 pocillos. Posteriormente, sesembraron por duplicado 100 μ;l de una suspensión de cada cepa y se incubaron durante 3 h a 37°C en unaatmósfera de 5% CO2. Para recuperar las células con las bacterias adheridas se agregó a cada pocillo 200 μ;lde Tripsina-EDTA y se incubó 10 minutos a 37°C. Se lavó 2 veces con 400 μ;l de PBS estéril y se recuperó todoel volumen del lavado que se sembró en placas de Agar Mc Conckey. Se realizó el recuento de UFC que indica elnúmero de bacterias adheridas a las células HEp-2.Resultados: Las cepas O91 LAA-positivas mostraron mayor número de bacterias adheridas a la línea celular,aunque con variaciones en el número entre cada aislamiento, que la mutante carente de LAA, y la cepaHB101pvbhes.Conclusiones: Las diferencias individuales pueden deberse a la presencia de múltiples adhesinas, codificadasfuera de LAA. Estos resultados permitirían confirmar la función de adherencia de esta novel isla depatogenicidad LAA, de importancia en cepas carentes de LEE.