Nuevas tecnologías aplicadas al diagnóstico de agentes infecciosos y parasitario. Desarrollo de la prueba de FPA para el diagnóstico de agentes infecciosos

GUTIÉRREZ, SILVINA ELENA; LARSEN, ALEJANDRA; RODRIGUEZ, MACARENA; LUTZELSCHWAB, CLAUDIA; PANEI, CARLOS JAVIER; ESTEIN, SILVIA MARCELA; JULIARENA, MARCELA; MÓRTOLA, EDUARDO; BENCE, ANGEL RICARDO

Tandil

Jornada; II Jornadas Internas de Investigación y posgrado. Desarrollo científico integrado en salud Animal; 2019

Secretaría de Investigación y posgrado FCV-UNCPBA. CIVETAN

Se produjo la proteína BLVp24 en el sistema de expresión bacteriano, con alta pureza y libre de contaminantes. Esta proteína mostró fuerte reactividad con sueros policlonales y monoclonales de referencia. Se conjugó la BLVp24 con FITC, y se probó la reactividad de la proteína conjugada en dot blot. En las pruebas de optimización de FPA no se logró obtener las condiciones que permitan discriminar sueros positivos y negativos. Uno de los principales obstáculos fue la poca estabilidad de la proteína conjugada. En su reemplazo, se estandarizó una prueba de ELISA indirecto utilizando como antígeno la BLVp24 recombinante. La evaluación preliminar muestra que es una técnica muy sensible para detección de anticuerpos anti BLVp24. Actualmente se está evaluando su capacidad de discriminación de animales de alta y baja carga proviral.La proteína BLVgp51 se produjo infectando células de la línea Hi5 con baculovirus recombinante. La glicoproteína producida migra con un peso molecular aproximado de 34 kDa y queda mayormente asociada a las células y poco en el sobrenadante. El rendimiento del procedimiento es muy bajo (del orden de los 15ug/ml de proteína purificada). La caracterización de la proteína por Western Blot con sueros policlonales muestra una señal extremadamente débil. Dado su bajo rendimiento y antigenicidad se consideró que la BLVgp51 producida no es adecuada para estandarizar un ensayo de FPA.La proteína OMP31 de Brucella se obtuvo en el sistema bacteriano y se purificó por afinidad. Los resultados de los ensayos de caracterización antigénica mediante ELISA y Western Blot con sueros porcinos hasta el momento no justifican el desarrollo de una prueba de FPA para esta proteína.