Análisis estructural de las acuaporinas de Trypanosoma cruzi

ZERBETTO DE PALMA GG; PENAS F; ARMENTIA LUCIANO; FOX ANA R; ALLEVA K; TESAN FIORELLA ; PARODI L; GOREN N

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Simposio; XIX Simposio Internacional sobre Enfermedades Desatendidas; 2019

Mundo Sano

El estudio de blancos moleculares en la membrana plasmática de parásitos está siendo considerado como clave para la incorporación de nuevas opciones Terapéuticas. Entre estos blancos, las acuaporinas (AQP) se presentan como buenos candidatos. Las AQP constituyen una familia de canales muy distribuida y diversificada cuya estructura se encuentra altamente conservada entre especies. Estos canales transportan principalmente agua, pero algunos miembros de estafamilia también transportan otros solutos (glicerol, H2O2,etc.)1. Trypanosoma cruzi (Tc) tendría más de una variante de AQP en su genoma, pero sólo hay resultados funcionales parciales para una sola variante2, esto hace que el estudio de las características estructurales del conjunto de TcAQP sea clave para evaluar la relevancia de estos canales en la fisiología del parásito. Se buscaron todas las secuencias compatibles con AQP en genomas de las cepas disponibles de Tc en TryTripDB (https://tritrypdb.org/tritrypdb/). A partir decDNA extraído de tripomastigotes de la cepa RA (cultivados en células Vero) se realizaron PCR para clonar y secuenciar las TcAQP. Con las secuencias amplificadas e insertadas en el vector PT7TS se transformaron bacterias (E coli, DH5), se purificó el plásmido y se envió a secuenciar cada variante (Macrogen). Se realizaron estudios de similitud de secuencia incluyendo las cepas de la base de datos y la cepa RA y se evaluó la DTU de cada cepa (ClustalW, BLAST y MEGA X). Se evaluaron aminoácidos claves (posiciones de Frogger) y motivos específicos para transporte (Ar/R, NPA1 y NPA2) para cada canal. A modo de referencia se construyeron modelos tridimensionales ab initio para las TcAQP de la cepa Brener (Rosetta, iTasser). Se encontraron 4 variantes de TcAQP (𝛂 a𝛅) para las 13 cepas de Tc alojadas en TryTripDB. Los tamaños rondan los 230 aminoácidos a excepción de la (450). El análisis de residuos de Frogger y motivos característicos de AQP son indicativos de que se trata de AQP con transporte específico de agua, aunque una de ellas, la TcAQP presentavariaciones en sus motivos NPA (NPM y NPS). Los modelos muestran estructuras tridimensionales conservadas. Se realizó el primer análisis estructural in silico de TcAQP de todas las cepas de Tc con genoma disponible, más las de la cepa RA, relevante para nuestra región. Estos resultados permitirán abordar el siguiente paso que consiste en el análisis funcional in vitro de transporte de cada TcAQP.