Niveles de expresión de la toxina Shiga subtipo 2a en cepas STEC y su relación con características genéticas de los fagos

KRÜGER ALEJANDRA; KRÜGER ALEJANDRA; BURGÁN JULIA; LUCCHESI PAULA M. A.; BURGÁN JULIA; LUCCHESI PAULA M. A.

Tandil

Jornada; 1ras JORNADAS INTERNAS DE INVESTIGACIÓN Y POSGRADO; 2018

Facultad de Ciencias Veterinarias. UNCPBA.

diarreas y graves enfermedades como colitis hemorrágica (CH) y síndrome urémico hemolítico (SUH). Si bien la patogenicidad de STEC es un fenómeno multifactorial, el principal factor de virulencia es la producción de toxinas Shiga (Stx) cuyos genes se encuentran codificados en profagos. Existen diversos subtipos de Stx, siendo el Stx2a el mayormente asociado a casos de SUH. Además, se ha sugerido que la virulencia de STEC también se correlaciona con la cantidad de Stx2 producida. En general, los genes stx se encuentran en la región tardía de los profagos. La proteína antiterminadora Q permite la transcripción de genes tardíos e influye en la expresión stx.Los objetivos de este trabajo fueron evaluar los niveles de expresión basales e inducidos de stx2a en cepas STEC, analizar regiones flanqueantes a stx2a (presencia del gen ninG y de variantes q) y comparar los niveles de expresión teniendo en cuenta los genotipos encontrados.Un total de 34 cepas STEC fueron elegidas para este estudio. Para evaluar los niveles de expresión de stx2a, las cepas se cultivaron en LB y a una mitad de cada cultivo se le agregó mitomicina C para inducir el ciclo lítico del fago. Se extrajo el ARN, se retrotranscribió a ADNc y se diluyó 1/10 para su análisis por qPCR. Para las reacciones de qPCR se utilizaron los primers 2SF/2R (400 nM c/u) o TufAqR/TufAqF (300 nM c/u) para amplificar stx2a o el gen housekeeping, tufA, respectivamente (de Sablet et al., 2008). La cepa E. coli EDL933 se usó como referencia. Los resultados se analizaron en base al método ΔΔCT y las diferencias de expresión se compararon mediante el análisis de varianza (ANOVA). La presencia del gen ninG (Unkmeir y Schmidt, 2000) y de las variantes q933, q21 y qO111 se determinaron mediante PCR (Unkmeir y Schmidt, 2000; Smith et al., 2007; LeJeune et al., 2004; Haugum et al., 2012).En la mayoría de las cepas los niveles de expresión de stx2a en condiciones de inducción fueron más altos que los niveles basales. En una única cepa no se detectó expresión en ninguna de las condiciones. En cuanto a las variantes de q, 19 cepas portaban sólo el subtipo q933, 11 portaban q933 y q21, una cepa el qO111 y tres cepas fueron negativas para las variantes analizadas. Estas 4 últimas cepas resultaron negativas para el gen ninG. Los análisis estadísticos revelaron que los niveles de expresión basal fueron menores en las cepas portadoras de q933 comparadas con las positivas para q933 y q21. Además, las cepas negativas para ninG expresaron niveles basales más bajos que las positivas. No se observaron diferencias significativas entre los niveles de expresión inducida.Los resultados sugieren que características genéticas de los fagos, particularmente en la región upstream de stx2a, pueden influir en la expresión de este gen.