Análisis de los genes v-Bcl2 y v-Flip de seis aislamientos locales del Gammaherpesvirus bovino 4 (BoHV-4)

ROMEO, F; PEREZ, S. E; MANRIQUE, J; JONES, L; MORÁN, P; ODEÓN, A; VERNA, A

Vaquerías

Congreso; XXXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2018

SAV

Los virus, en su proceso evolutivo, han desarrollado mecanismos específicos para eludir las defensas del hospedador. Algunos virus codifican factores inhibitorios de la apoptosis durante la infección. El BoHV-4 posee dos genes (ORF16 y ORF71) que codifican las proteínas v-Bcl2 y v-Flip, respectivamente. Si bien está comprobado que estas proteínas virales no poseen actividad proapoptótica, según los resultados de algunos ensayos experimentales in vitro, la infección con BoHV-4 podría inducir apoptosis mediante diferentes procesos. Debido a lo controvertido de estos resultados, es importante estudiar los genes que se asocian con la capacidad de BoHV-4 de inducir o inhibir la apoptosis en células infectadas. El objetivo de este trabajo fue analizar los genes v-Flip y v-Bcl2 de seis aislamientos locales de BoHV-4 filogenéticamente divergentes, clasificados como genotipos 1 (tipo Europeo), 2 (tipo Americano) y 3 (nuevo genotipo), para determinar si existen diferencias genéticas entre las distintas cepas. Las cepas de BoHV-4 se propagaron en células MDBK, se extrajo el ADN y se amplificaron e ambos genes mediante PCR: BoHV-4- vBcl2-F 5´ tgggctattaaccaccttgc 3´, BoHV-4- vBcl2- R 5´ aggtggtctccacaatcagg 3´ (producto: 416 pb) y BoHV-4- vFlip -F 5´ ctggtcctaccatggcaact 3´, BoHV-4- vflip -R 5´ taccagggatgtgttgcttg 3´ (product0: 437 pb). Fue posible amplificar ambos genes en las cepas 09/508 (genotipo 1), 12/365 (genotipo 2) y las cepas 09/227 y 07/435 (genotipo 3). No fue posible amplificar ninguno de los dos genes en las cepas 08/263 y 08/330 (genotipo 2). El análisis de la secuenciación y alineamiento reveló que l v-Bcl2 de las cepas del genotipo 3 (09/227 y 07/435) presentó 13 sitios variables, mientras que en las cepas 09/508 y 12/365 se identificaron tres sustituciones. En las cepas 09/227 y 07/435 también se detectaron dos sustituciones aminoácidicas. En el alineamiento del gen v-Flip se detectaron 15 sustituciones, para las cepas 09/227 y 07/435; en la cepa 09/508 se hallaron 12 sustituciones y la cepa 12/365 presentó ocho sustituciones. En la proteína v-Flip se evidenciaron siete sustituciones aminoacídicas en las cepas del genotipo 3 y cinco en las cepas 09/508 y 12/365. Los resultados de este estudio demostraron que existen variaciones en los genes vflip y vbcl2 asociadas al genotipo viral lo cual podría influir en la capacidad para inducir apoptosis y manifestarse en distintas características biológicas de los distintos aislamientos locales de BoHV-4. Esto también podría asociarse con distintos comportamientos de las cepas in vivo