CIVETAN   23983
CENTRO DE INVESTIGACION VETERINARIA DE TANDIL
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
DETECCIÓN y caracterización genotípica DE STEC, ETEC e integrones EN TERNEROS NEONATALES
Autor/es:
MOSCUZZA H; ANALÍA I. ETCHEVERRÍA; COLELLO ROCÍO; NORA L. PADOLA; RUIZ, JULIA
Lugar:
Santiago
Reunión:
Congreso; XXIV Congreso Latinoamericano de Microbiología; 2018
Institución organizadora:
Asociación Latinoamericana de Microbiología
Resumen:
MICROBIOLOGÍA, ENFERMEDADES INFECCIOSAS Y PARASITARIASDETECCIÓN Y CARACTERIZACIÓN GENOTÍPICA DE STEC, ETEC E INTEGRONES EN TERNEROS NEONATALESCOLELLO, Rocío 1-2; RUIZ, Julia 1-2; MOSCUZZA, Hernan2 ETCHEVERRÍA, Analía 1-2; PADOLA, Nora 1-2; 1Laboratorio de Inmunoquímica y Biotecnología, Facultad de Ciencias Veterinarias, UNCPBA, Argentina.2Centro de Investigación Veterinaria de Tandil (CIVETAN), CONICET, CICPBA.rocioc@vet.unicen.edu.ar INTRODUCCIÓN: Las enfermedades transmitidas por alimentos (ETA) constituyen un problema sanitario y económico de relevancia mundial y son el resultado de la ingestión de alimentos, productos alimenticios o agua contaminados. Un importante agente causal de ETA es Escherichia coli productora de toxina Shiga (STEC), asociado a casos esporádicos de brotes de diarrea, colitis hemorrágica y síndrome hemolítico urémico (SHU). Está presente en el tracto digestivo de mamíferos, y se considera al bovino el principal reservorio de estos microorganismos (Padola et al., 2004, Fernández et al., 2009). La característica de STEC es su capacidad de producir y liberar toxinas shiga (stx1, stx2) Además, posee otros factores de virulencia como la intimina, codificada en el gen eae, un megaplásmido que contiene los genes para la síntesis de una enterohemolisina codificada en el gen ehxA, entre otros (Paton y Paton, 2002).Otro agente causal de ETA es Escherichia coli Enterotoxigénico (ETEC) causante de patologías en el humano por desequilibrio hidroeléctrico de las células de la mucosa intestinal debido a la producción de una toxina termolábil (LT) y/o otra termoestable (ST) codificada en los genes lt y st respectivamente. ETEC representa la mayor causa de la diarrea del viajero en humanos en el mundo (Nyholm et al., 2015).El desarrollo y utilización de antibióticos ha sido de suma importancia para la resolución de infecciones. La presión de selección que estos ejercen sobre las poblaciones bacterianas, condujo a la aparición y diseminación de distintos mecanismos de resistencia. Una de las formas de diseminación de resistencia se encuentra representada por integrones, que son elementos genéticos móviles capaces de integrar y expresar genes de resistencia a antibióticos. La estructura mínima de un integrón incluye: 1- el gen para la integrasa (intI), 2- un sitio adyacente de recombinación, y 3- al menos un promotor (Di Conza y Gutkind, 2010). El objetivo de este trabajo fue detectar y caracterizar STEC, ETEC e integrones en terneros neonatales de la provincia de Buenos Aires.MATERIALES Y MÉTODOS: Se realizaron dos muestreos de 8 y 15 animales mediante hisopado rectal. Los hisopos fueron diluidos en 2 ml de solución fisiológica y se sembraron en placas de agar MacConkey a 37 ºC durante 24 h. Se seleccionaron 6 colonias características en cada placa, se cultivaron en caldo Luria Bertani (LB). Posteriormente se tomó una alícuota y se colocaron en 500 µl de agua bidestilada, llevándose a ebullición para liberación de ADN. La presencia de genes de virulencia de STEC se determinó mediante reacción de PCR multiplex detectándose simultáneamente los genes stx1, stx2, ehxA, eae, ehxA. La detección de los genes lt y st de ETEC y integrasas codificantes de integrones clase 1 y 2 (intl1 e intl2 respectivamente) se determinaron por PCR monoplex . RESULTADOSDel total de las muestras analizadas se lograron caracterizar 93 aislamientos. Dentro de los factores de virulencia de STEC, se detectó un 18,3% de cepas con los genes stx1, ehxA y eae, un 3,2% con los genes stx1 y eae, y un 3,2% con el gen eae. En cuanto a ETEC, se detectó un 2,15% de genes st. Del total de los aislamientos (STEC y ETEC) se obtuvo un 28% de cepas que portaban el gen intl1 y un 1,1% portaban los genes intl2. DISCUSIÓN: El gen stx1 predominó en las muestras positivas, aunque difiere de acuerdo con otros estudios realizados en nuestro país, donde se observó que el gen stx2 era el más prevalente en ganado bovino (Fernández et al., 2009). Padola et al. (2004) reportó un 45,8% de prevalencia para stx2, un 11,9% de cepas positivas a ambas toxinas y de 5,1% stx1. Si bien se observó una baja prevalencia de ETEC, numerosos estudios han demostrado que la colibacilosis causadas por ETEC son frecuentes en terneros y afectan a animales de pocos días de edad (Abutarbush, 2010). En concordancia con nuestro estudio se ha demostrado que cepas STEC y ETEC poseen genes que codifican resistencias a antibióticos (Maynard et al., 2003). El uso de antibióticos con distintas finalidades ha determinado que las bacterias desarrollen mecanismos de resistencia, tales como los integrones, sumado a que estas cepas pueden transferir resistencia a antibióticos a otras siendo altamente peligroso para la salud pública.(AalbæK et al., 1991). CONCLUSION: Estos resultados indican que los terneros son portadores de cepas STEC y ETEC. Además, conociendo la patogenicidad y morbilidad de estos patógenos para el hombre, la presencia de integrones implica un riesgo adicional para el hombre si estas cepas ingresan a la cadena alimenticia.BIBLIOGRAFÍAAALBÆK B.,RASMUSSEN J.,NIELSEN B. & OLSEN J. 1991. Prevalence of antibiotic‐resistant Escherichia coli in Danish pigs and cattle. APMIS, 99, 1103-1110.ABUTARBUSH S. M. 2010. Veterinary medicine?a textbook of the diseases of cattle, horses, sheep, pigs and goats. The Canadian Veterinary Journal, 51, 541.DI CONZA J. & GUTKIND G. 2010. Integrones: los coleccionistas de genes. Revista argentina de microbiología, 42, 63-78.FERNÁNDEZ D.,RODRIGUEZ E.,ARROYO G. H.,PADOLA N. L. & PARMA A. E. 2009. Seasonal variation of Shiga toxin‐encoding genes (stx) and detection of E. coli O157 in dairy cattle from Argentina. Journal of applied microbiology, 106, 1260-1267.MAYNARD C.,FAIRBROTHER J. M.,BEKAL S.,SANSCHAGRIN F.,LEVESQUE R. C.,BROUSSEAU R.,MASSON L.,LARIVIERE S. & HAREL J. 2003. Antimicrobial resistance genes in enterotoxigenic Escherichia coli O149: K91 isolates obtained over a 23-year period from pigs. Antimicrobial agents and chemotherapy, 47, 3214-3221.NYHOLM O.,HEINIKAINEN S.,PELKONEN S.,HALLANVUO S.,HAUKKA K. & SIITONEN A. 2015. Hybrids of Shigatoxigenic and Enterotoxigenic Escherichia coli (STEC/ETEC) Among Human and Animal Isolates in Finland. Zoonoses and public health.PADOLA N. L.,SANZ M. E.,BLANCO J. E.,BLANCO M.,BLANCO J.,ETCHEVERRIA A. A. I.,ARROYO G. H.,USERA M. A. & PARMA A. E. 2004. Serotypes and virulence genes of bovine Shigatoxigenic< i> Escherichia coli(STEC) isolated from a feedlot in Argentina. Veterinary microbiology, 100, 3-9.PATON A. W. & PATON J. C. 2002. Direct detection and characterization of Shiga toxigenic Escherichia coli by multiplex PCR for stx1, stx2, eae, ehxA, and saa. Journal of Clinical Microbiology, 40, 271-274.