EVALUACIÓN DE LA TÉCNICA DE DOT BLOT CON DOS ANTÍGENOS DIFERENTES PARA EL DIAGNOSTICO DE LA FASCIOLASIS OVINA

ALVAREZ, L; CANTON, C; ESTEIN, S; SOLANA, H; DOMINGUEZ, P; ORTIZ, P; FERNANDEZ, V; CEBALLOS, L; DIAZ, A

Panamá

Congreso; XXV Congreso Panamericano de Ciencias Veterinarias (PANVET); 2016

PANVET

EVALUACIÓN DE LA TÉCNICA DE DOT BLOT CON DOS ANTÍGENOS DIFERENTES PARA EL DIAGNOSTICO DE LA FASCIOLASIS OVINA. Vanesa Fernández1; Hugo Solana1; Luis Álvarez1; Laura Ceballos1; Paula Domínguez1; Candela Canton1; Alejandra Díaz1; Pedro Ortiz2; Silvia Marcela Estein1 La fasciolasis es una zoonosis parasitaria de distribución cosmopolita producida por el trematodo Fasciola hepatica. El diagnóstico directo no es 100% confiable. El serodiagnóstico podría representar una alternativa práctica para detectar la presencia de la enfermedad a nivel poblacional e implementar medidas de control oportunas.El objetivo del presente trabajo fue detectar la presencia de anticuerpos séricos contra F. hepatica con la técnica de Dot Blot, empleando dos antígenos diferentes: el antígeno somático (Ag somático) y la proteína Glutation S Transferasa recombinante (GSTr) a diferentes tiempos post-infección. Para evaluar la sensibilidad y la especificidad de la prueba con cada uno de los antígenos se emplearon sueros de ovinos infestados en forma artificial con F. hepatica y con el nematodo Haemonchus contortus, respectivamente. Se emplearon como antígenos el Ag somático producido a partir de fasciolas conservadas en RNA later, y procesadas según el método previamente descripto (Bautista y Morrilla, 1986), y la proteína GSTr que fue sintetizada, expresada y purificada en Genscript, Korea. Se inocularon ocho ovinos adultos sanos de la raza Corriedale con una dosis de 50 metacercarias de F. hepatica/animal. Se obtuvieron muestras de suero previo a la infección y cada 15 días post-infección hasta el día 105, tiempo en el que se confirmó presencia de huevos en heces. Como control negativo se utilizaron los sueros obtenidos previos a la infestación y como control positivo un suero de animal con infestación confirmada. En paralelo, se inocularon tres ovinos adultos sanos de la misma raza con larvas infectantes de H. contortus y al día 34 post-infección se obtuvieron muestras de suero una vez que se confirmó la presencia de huevos en heces. La técnica Dot Blot con el Ag somático detectó anticuerpos inducidos por F. hepatica desde el día 15 y la GSTr desde el día 90 en todos los animales y hasta el final del ensayo. Esto indica que el empleo de Ag somático permitió detectar la fase aguda mientras que la GSTr sólo detectó la presencia de infección en la fase crónica de la enfermedad. Para analizar la especificidad de los antígenos se analizaron muestras de ovinos infestados con H. contortus, para descartar la presencia de reacciones cruzadas entre los dos parásitos. El empleo del Ag somático detectó reacciones cruzadas contra H. contortus mientras que no se observó reacción contra GSTr. Los resultados obtenidos nos permiten concluir que la complejidad antigénica del antígeno somático reduce la especificidad de la técnica debido a que se detectan reacciones cruzadas con H. contortus. No se observaron reacciones contra GSTr. El empleo de la GSTr permite detectar específicamente la infestación con F. hepatica, aunque en una etapa crónica de la enfermedad. Estos estudios serán complementados en el futuro con el desarrollo de una técnica de ELISA indirecto que permita detectar animales infestados que no son detectados por el diagnóstico directo. Por otro lado, se analizarán las proteínas del Ag somático y se identificará los antígenos