Evaluación de la técnica de dot blot con dos antígenos diferentes para el diagnóstico de la fasciolasis ovina

ALVAREZ, LUIS; CANTÓN, CANDELA; ESTEIN, S.M; FERNANDEZ, VANESA; CEBALLOS, LAURA; DÍAZ, A.G; SOLANA, HUGO; DOMINGUEZ, PAULA; ORTIZ OBLITAS, P.

Ciudad de Panama

Congreso; XXV Congreso Panamericano de Ciencias Veterinarias (PANVET); 2016

Asociación Panamericana de Ciencias Veterinarias

Evaluación de la técnica de Dot Blot con dos antígenos diferentes para el diagnóstico de la fasciolasis ovinaFernández Vanesa1,2; Solana Hugo1,3; Álvarez Luis1,2,; Ceballos Laura1,2; Domínguez Paula1,2; Canton Candela1,2; Díaz Alejandra1,2,; Ortiz Pedro; Estein Silvia Marcela.1,2 1Fac. Cs. Veterinarias, CIVETAN, Universidad Nacional del Centro de la Pcia. de Buenos Aires, Argentina2 CONICET, Argentina3 CIC, Pcia. Buenos Aires, ArgentinaCorreo electrónico: vanesaf@vet.unicen.edu.arTeléfono: 0249-4385850.La fasciolasis es una zoonosis parasitaria intrahepática de distribución cosmopolita producida por el trematodo Fasciola hepatica que ocasiona pérdidas económicas significativas en los rumiantes. Se presenta en casi todas las regiones en donde habitan rumiantes. La enfermedad constituye una zoonosis importante que afecta la población humana suburbana en países subdesarrollados de zonas tropicales y subtropicales. El diagnóstico directo no es 100% confiable y además, no es útil para diagnosticar la etapa prepatente de la infección (fase aguda), ya que los parásitos por ser inmaduros no producen huevos. El serodiagnóstico podría representar una alternativa práctica para detectar la presencia de la enfermedad a nivel poblacional e implementar medidas de control oportunas.El objetivo del presente trabajo fue detectar la presencia de anticuerpos contra F. hepatica con la técnica de Dot Blot empleando dos antígenos diferentes: el antígeno somático (Ag somático) y la proteína Glutation S Transferasa recombinante (GSTr) a diferentes tiempos posinfestación. Para evaluar la sensibilidad y la especificidad de la prueba con cada uno de los antígenos se emplearon sueros de ovinos infestados experimentalmente con F. hepatica y con Haemonchus contortus, respectivamente Se emplearon como antígenos: el Ag somático producido a partir de fasciolas conservadas en RNA later, y procesadas según el método descripto por C.R. Bautista y A. Morrilla, Manual de Inmunología 1986, y la proteína GSTr que fue sintetizada, expresada y purificada en Genscript, Korea. Se inocularon ocho ovinos adultos sanos de la raza Corriedale con una dosis de 50 metacercarias de F. hepatica/animal. Se obtuvieron muestras de suero previa infestación y posteriormente cada 15 días hasta el día 105, tiempo en el que se confirmó presencia de huevos en heces (estadio adulto). Como control negativo se utilizaron los sueros obtenidos previos a la infestación y como control positivo un suero de animal con infestación confirmada. En paralelo, se inocularon tres ovinos adultos sanos de la misma raza con larvas infectivas de H. contortus y al día 34 posinfestación se obtuvieron muestras de suero una vez que se confirmó la presencia de huevos en heces. La técnica Dot Blot con el Ag somático detectó anticuerpos inducidos por F. hepatica desde el día 15 y la GSTr desde el día 90 en todos los animales y hasta el final del ensayo. Esto indica que el empleo de Ag somático permitió detectar la fase aguda mientras que la GSTr sólo en la fase crónica de la enfermedad.Para analizar la especificidad de los antígenos se analizaron muestras de ovinos infestados con H. contortus contra ambos antígenos para descartar la presencia de reacciones cruzadas entre los dos parásitos. El empleo del Ag somático detectó reacciones cruzadas contra H. contortus mientras que no se observó reacción contra GSTr.Los resultados obtenidos nos permiten concluir que la complejidad antigénica del antígeno somático reduce la especificidad de la técnica debido a que se detectan reacciones cruzadas con H. contortus. No se observaron reacciones contra GSTr. El empleo de la GSTr permite detectar específicamente la infestación con F. hepatica aunque en una etapa crónica de la enfermedad, estos estudios serán complementados en el futuro con el desarrollo de una técnica de ELISA indirecto que permita detectar animales infestados que no son detectados por el diagnostico directo. Por otro lado, analizaremos las proteínas del Ag somático e identificaremos los antígenos inmunodominantes para apuntar a un diagnóstico precoz de la fasciolosis con el objetivo de mejorar las medidas de control.