PENETRACIÓN DEL ANTIBIÓTICO FOSFOMICINA EN CÉLULAS BLANCAS SANGUÍNEAS PORCINAS

PÉREZ, D.S.; MARTÍNEZ, G.; FERNÁNDEZ PAGGI, M.B.; RICCIO, M.B.; DECUNDO, J.; DIEGUEZ, S.; AMANTO, F.; TAPIA, M.O.; SORACI, A.L.

Resistencia, Chaco

Congreso; XIII Congreso Nacional de Producción Porcina - VIII Congreso de Producción Porcina del Mercosur - IXX Jornadas de Actualización Porcina.; 2016

Universidad de Río Cuarto, Universidad de Buenos Aires, INTA

INTRODUCCIÓNFosfomicina (FOS) es un antibiótico (ATB) bactericida de amplio espectro, utilizado en producción porcina. En el cerdo, los fluidos celulares e intersticiales son biofase de organismos intracelulares facultativos causante enfermedades infecciosas (1). Por otro lado, la elección de un ATB es dependiente de su actividad antimicrobiana directa, la cual se detecta in vitro por determinación de la CIM (2). Una CIM90 de 0,25-0,50 μg/mL se ha determinado para los patógenos más importantes en producción porcina (3). El objetivo de este trabajo fue estudiar la penetración de FOS en células blancas sanguíneas porcinas mediante estudios in vitro e in vivo y determinar si estas superan la CIM90.MATERIAL Y MÉTODOSAnimales: 12 lechones de destete, clínicamente sanos, divididos en dos grupos (A: n=6, estudio in vitro, no tratados con antimicrobianos; B: n=6, estudio in vivo).ATB: FOS disódica (pureza 98,90%), Bedson S.A.Dosis: 150 μg/mL (in vitro); 15 mg/kg (in vivo).Muestreo: 5 mL de sangre por animal obtenidos por técnica de cateterismo yugular y colocados en tubos de vidrio conteniendo citrato de sodio como anticoagulante, proporción 1:4 (Grupo A: tiempo cero; Grupo B: 0,5; 1; 2; 3; 4; 6; 8; 12; 18 y 24 hs).Separación celular: Se centrifugaron las muestras (15 min., 2500 rpm), se obtuvieron las capas blancas y se sembraron en 10 mL de ClNH4. Se centrifugaron (7 min., 3000 rpm), se descartó el sobrenadante y se levantó el pellet con pipeta. Se lavó con agua HPLC y se centrifugaron nuevamente (10 min., 1000 rpm). Se resuspendió en 1 mL de Minimum Essential Médium (MEM) y se tomó una alícuota para coloración vital y recuento celular. Se efectuó siembra de las células blancas en placas de cultivo de 24 pocillos, a los cuales se les adicionó 1 mL de MEM con Suero Fetal Bovino.Cuantificación de la captación celular de FOS: Para el ensayo in vitro, las células fueron incubadas a 37ºC con 1 mL de FOS disódica (150 μg/mL). A los mismos tiempos de muestreo del ensayo in vivo se recogieron los sobrenadantes de cada pocillo y se centrifugaron (3500 rpm, 6 min.) a fin de obtener la FOS extracelular. Se adicionaron 2 mL de agua HPLC, se sellaron las placas de cultivo y se sometieron a ultrasonicado por 30 min. a fin de romper las células y liberar la FOS al agua. El contenido de cada pocillo se centrifugó (10.000 rpm, 4ºC), se filtró, se colocó en viales y se determinaron por HPLC-MS/MS las concentraciones intracelulares del ATB. Los ensayos se realizaron por cuadruplicado.RESULTADOSEn el ensayo in vitro la concentración intracelular del ATB se mantuvo entre 0,89 y 3,88 μg/mL, la Cmax fue de 3,88 μg/mL y el Tmax fue de 4 hs; mientras que en el estudio in vivo la concentración intracelular estuvo entre 0,16 y 1,33 μg/mL, la Cmax fue de 1,33 μg/mL y el Tmax de 0,50 hs. La Figura 1 muestra la penetración intracelular media de FOS en células blancas sanguíneas luego de ambos estudios. El AUC, la Cmax y el Tmax de FOS en plasma de lechones de destete fueron determinados en estudios previos del grupo de trabajo (4). El grado de penetración de FOS en células blancas se determinó comparando su AUC0-t con el AUC0-t de plasma. La Tabla 1 resume los parámetros farmacocinéticos (PK) hallados en plasma y células blancas sanguíneas mediante estudios in vivo e in vitro.DISCUSIÓNLa penetración de los fármacos en diversos tejidos se describe mejor por el uso de las AUC, que responden a variaciones en la concentración en el tiempo (5). La comparación de AUC en sangre-plasma (AUCCBSang vs AUCplasma) se consideró significativa (pCIM=24 hs). Al comparar los resultados del estudio in vivo con los obtenidos para el estudio in vitro, se observa que el valor de AUCCBSang vs AUCplasma es un 18,75% del valor hallado en el estudio in vitro (0,06 vs. 0,32). Las concentraciones del ATB in vivo se mantuvieron entre 0,16 y 1,33 μg/mL, valores que igualmente se encuentran por encima de la CIM90 por más de 4 hs (T>CIM=4 hs).