Identificación de una banda proteica en filtrados libres de células de Campylobacter fetus con posible efecto citoletal

ACEVEDO, M.E. ; SOLANA, H. ; CHIAPPARRONE M.L.; CATENA M.

Buenos Aires

Jornada; V Jornadas de Jóvenes Investigadores. Ciencia y Sociedad.; 2015

Facultad de Ciencias Veterinarias. UBA.

La campybacteriosis digestiva es producida por Campylobacter jejuni y C. coli, entre otros. Dichas especies expresan una toxina de distensión citoletal (cytolethal distending toxin-CLDT) de 68 kDa. La misma ha sido caracterizada genotípicamente y evaluado su efecto en varias líneas celulares. Por otro lado, la campylobacteriosis genital bovina es causada por C. fetus subsp. fetus y C. fetus subsp. venerealis. En estas subespecies existen estudios preliminares de la patogenia de la enfermedad, pero poco se conoce sobre la probable presencia de una toxina citoletal. Ensayos previos de nuestro grupo, han demostrado que el filtrado libre de células (FLC) de C. fetus posee efecto citoletal en células HeLa y CHO, desconociéndose si los hallazgos se relacionarían con la presencia de una CLDT específica. El objetivo del presente trabajo fue la identificación de las proteínas presentes en el filtrado libre de células de Campylobacter fetus. Se evaluaron 10 FLC de diferentes cepas del tracto reproductor de bovinos. Se cuantificaron las proteínas totales por el método de Bradford utilizando como control negativo el filtrado del Caldo Brucella (CB) libre de campylobacter. Posteriormente, se analizó el contenido proteico de los FLC por medio de electroforesis en SDS-PAGE al 10% utilizando el CB como control negativo. Los 10 FLC analizados presentaron una gran variabilidad en la concentración de sus proteínas totales (de 0,0349 a 3,731 mg/mL). En seis FLC se observó una única banda proteica con un peso molecular de aproximadamente 70 kDa, la cual no se visualiza en el CB control. Los cuatro FLC restantes no presentaron ninguna banda visible. La variabilidad en la concentración de proteínas detectadas en los diferentes FLC podría deberse al comportamiento individual de cada cepa, siendo ésto motivo de estudio en futuros trabajos. La proteína de 70 kDa detectada en los FLC de C. fetus podría estar asociada al efecto de citoletalidad descripto en células HeLa y CHO, para lo cual se preveen estudios de purificación y análisis. La electroforesis en SDS-PAGE posee un límite mínimo de detección cercano a los 8 microgramos, por lo cual se debería realizar estudios posteriores para evaluar aquellos FLC que no presentaron banda.