Actividad metabólica y sensibilidad a antibióticos para la identificación de cepas de Campylobacter fetus

CHIAPPARRONE M.L.; ECHEVARRÍA H.M.; MORSELLA C. ; CACCIATO C.; PAOLICCHI F. ; SOTO P.; CATENA M.

San Miguel de Tucumán. Tucumán.

Congreso; XX Reunión Científico Técnica de la AAVLD; 2014

AAVLD

Campylobacter es un género bacteriano perteneciente a la familia Campylobacteraceae que incluye bacilos en forma de coma, gaviota o ?S? y móviles por la presencia de uno o dos flagelos polares. Miden entre 0,5 y 5 micras de largo por 0,2 a 0,5 micras de ancho. Su temperatura óptima de crecimiento oscila entre 25 y 42 ºC en condiciones de microaerofilia (85% N, 10% CO2 y 5% de O2) y reaccionan positivamente a la oxidasa y a la catalasa. La especie Campylobacter fetus (C. fetus) con sus dos subespecies Campylobacter fetus subsp. venerealis (Cfv) y Campylobacter fetus subsp. fetus (Cff), causa la campilobacteriosis genital bovina, una de las enfermedades reproductivas de mayor importancia en nuestro país, estimándose una prevalencia del 24% en la provincia de Buenos Aires. Es una enfermedad de transmisión venérea que se caracteriza por producir pérdidas en la gestación temprana y abortos ocasionales. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el comportamiento de cepas de C. fetus aisladas en la provincia de Buenos Aires frente a diferentes pruebas metabólicas y agentes antimicrobianos.Se utilizaron 73 cepas indígenas de C. fetus aisladas de muestras de bovinos entre los años 1997 y 2014: muestras de esmegma prepucial (n=10), de mucus cérvico vaginal (n=20) y de fetos (n=43), provenientes del cepario del Laboratorio de Microbiología Clínica y Experimental de la Facultad de Ciencias Veterinarias (UNCPBA) y del Laboratorio de Bacteriología (EEA-INTA Balcarce). Las cepas fueron conservadas en nitrógeno líquido como primoaislamientos para su caracterización. Las subespecies de C. fetus fueron caracterizadas mediante pruebas bioquímicas convencionales: prueba de la catalasa y de la oxidasa, reducción de nitratos, producción de grupos sulfhidrilos en medio TSI, producción de sulfhidrilos en tiras de acetato de plomo en medio con cisteína, crecimiento en cloruro de sodio al 3,5% y tolerancia a la glicina al 1%. Del total de las cepas se caracterizaron como Cfv 38 (52 %) y como Cff 35 cepas (48%). Posteriormente, se evaluó el comportamiento de las cepas con pruebas no convencionales y repetición de pruebas convencionales con diferente componente activo al empleado en las pruebas de rutina: ureasa (URE), reducción de nitratos con nitrato potásico como componente activo (NIT), esterasa (EST), hidrólisis del hipurato (HIP), gamma glutamil transferasa (GGT), reducción del cloruro de trifenil-tetrazolio (TTC), pirrolidonil arilamidasa (PyrA), L-arginina arilamidasa (ArgA) y L-aspártico arilamidasa (AspA), fosfatasa alcalina (PAL), producción de sulfhidrilos con tiosulfato sódico como componente activo (H2S), asimilación de glucosa con D-glucosa (GLU), asimilación del succinato sódico (SUT), del acetato sódico (ACE), del propionato (PROP), del ácido málico (MLT) y del citrato trisódico (CIT) e inhibición del crecimiento en presencia de ácido nalidíxico (NAL), cefazolina sódica (CFZ) y sensibilidad a la eritromicina (ERO). El 100% de las cepas fueron positivas a la prueba de SUT y negativas a las pruebas de URE, HIP, GGT, PyrA, S2H, GLU, CIT, CFZ, PROP y ERO. Setenta y dos cepas (98,6%) fueron negativas a las pruebas de EST, AspA, PAL y MLT. Para la prueba de ArgA, 71 cepas (97%) fueron negativas. Dos cepas (2,7%) aisladas de fetos de distintas localidades, fueron positivas a ACE. La cepa N° 10.05 aislada de un feto en la localidad de Tandil en el año 2005 e identificada por pruebas bioquímicas tradicionales como Cff, por pruebas no tradicionales fue positiva a las pruebas de NIT, EST, TTC, ArgA, AspA, PAL, SUT, NAL, ACE y MLT e identificada como C. sputorum biovar faecalis. Los resultados demostraron que existe escasa variabilidad en el comportamiento bioquímico de las cepas, independientemente de su subespecie bacteriana y origen. Los resultados obtenidos por las pruebas de URE e HIP, coinciden con la bibliografía que cita un 100% de cepas negativas a ambas reacciones. Con respecto a NIT, el porcentaje de cepas de Cfv y Cff positivas (39,7 y 34,2%, respectivamente) es sensiblemente menor al informado por los autores, donde se estima que entre el 60-93% de Cfv y el 100% de Cff serían positivas. Si bien C. fetus oxida el citrato, succinato, fumarato, malato y oxalacetato, sólo se obtuvieron resultados positivos para el succinato sódico, el acetato sódico, ácido málico y citrato trisódico. Los resultados de las pruebas de URE, HIP, GGT, PyrA H2S, GLU, PROP, CIT, CFZ y ERO, fueron determinantes en la definición de la especie y subespecie bacteriana, mientras que los resultados de NIT y TTC fueron variables para Cfv y Cff. Se registró un bajo número de cepas resistentes a antibióticos. Las pruebas bioquímicas no convencionales permitieron la identificación de la cepa N° 10.05 como C. sputorum biovar faecalis, obteniendo resultados coincidentes con lo descripto para esta especie.