Detección de herpes virus bovino 4 (BoHV-4) en un sistema de producción in vitro de embriones bovinos.

GONZALEZ ALTAMIRANDA, ER; RÍOS, G; KAISER, G; LEUNDA, M; ODEÓN, A; PEREZ, S. E; VERNA, A

Jornada; IV Jornadas Internacionales del Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal.; 2014

INITRA

El estudio de los alfa herpes virus bovinos en los sistemas de producción in vitro (PIV) de embriones se ha focalizado principalmente en el herpesvirus bovino 1 (BoHV-1) y más recientemente, en el herpesvirus bovino 5 (BoHV-5). Sin embargo, hay escasa información disponible sobre las infecciones por BoHV-4 en estos sistemas. Este trabajo constituye el primer reporte, en nuestro país, de dos aislamientos de BoHV-4 a partir de material biológico como fuente primaria para sistemas de PIV de embriones bovinos. Las cepas de BoHV-4 fueron aisladas en los años 2011 y 2013 a partir de células del cumulus y ovocitos, respectivamente. Los complejos cumulus-ovocito (COCs) se obtuvieron a partir de ovarios provenientes de un frigorífico local mediante la técnica de aspiración por medio de la punción de folículos de 3-8 mm. Se los clasificó morfológicamente y aquellos que poseían al menos una capa de células del cumulus rodeando al ovocito fueron seleccionados para su maduración in vitro. Posteriormente, las células del cumulus fueron removidas por tratamiento con hialuronidasa (1%), lavadas con medio TCM-199, al igual que los ovocitos, y ambos sembrados en monocapa preformada de células MDBK para aislamiento viral (AV). Luego de tres pasajes en cultivo celular, se observó efecto citopático (ECP) característico de BoHV-4 a partir de células del cumulus y ovocitos en co-cultivo con células MDBK. Para confirmar los resultados del AV, se extrajo ADN de los cultivos celulares que presentaban ECP y se realizó una nested PCR para el gen de la thymidine kinase (TK). La especificidad de las reacciones se evaluó mediante el uso de ADN proveniente de cepas de referencia para BoHV-1 y BoHV-5. Se obtuvo una banda específica de 216 pb a partir del ADN de los ovocitos y células del cumulus en co-cultivo con células MDBK, la cual fue visualizada en gel de agarosa al 2% por tinción con SYBR® Safe (Invitrogen). El rol del BoHV-4 en trastornos reproductivos es objeto de estudio. Reportes previos han demostrado su asociación con casos de endometritis post-parto en hembras bovinas. Sin embargo, aún resta por determinar su rol como patógeno primario en problemas reproductivos y su posible impacto en los sistemas de PIV. Cabe destacar que estos resultados demuestran un indicio de riesgo potencial de transmisión de BoHV-4 mediante transferencia embrionaria.