Adsorción de la quimera BLSOMP31 en microesferas de quitosano para administración intranasal: preparación y caracterización in vitro de la formulación

DÍAZ A. G.; QUINTEROS D.; LLABOT J,; GHERSI G.; PALMA S.; ALLEMANDI D.; GOLDBAUM F.A.; ESTEIN S.M.

BUENOS AIRES

Otro; IV Escuela de Nanomedicinas; 2014

Adsorción de la quimera BLSOMP31 en microesferas de quitosano para administración intranasal: preparación y caracterización in vitro de la formulación A.G. Díaz1,5, D. Quinteros2, J. Llabot2, G. Ghersi3,4, S. Palma2, D. Allemandi2, F. A .Goldbaum3,4, S.M. Estein1 (1) Laboratorio de Inmunología, Depto. de Sanidad Animal y Medicina Preventiva, CIVETAN, CONICET, Fac. Ciencias Veterinarias, UNCPBA, (2) Depto. de Farmacia. Fac. Ciencias Químicas. UNC-CONICET-UNITEFA, (3) Fundación Instituto Leloir, (4) Inmunova S.A., (5) CONICET El quitosano es un polisacárido natural, degradable, biocompatible y de baja toxicidad cuyo empleo como portador de fármacos para administración por diversas vías se ha difundido en los últimos años. Los objetivos de este trabajo consistieron en la obtención y caracterización de las microesferas de quitosano (meQ) como un nuevo sistema de liberación modificada para la administración por la vía intranasal de la quimera recombinante BLSOMP31 (rBLSOMP31). Metodología. Las meQ fueron preparadas dispersando el polímero (0,5% p/v) en ácido acético al 0,5% con glutaraldehído al 4% en agitación continua durante 90 min a Tº ambiente. Luego se homogeneizó con Ultraturrax T 18 (6000 rpm 30 min) y finalmente la solución fue secada por ?spray dried? (Tº entrada 130º, % Aspiración 100, Bomba 10%, Aire de atomización 50 mm y Tº salida 76º). La adsorción de la proteína rBLSOMP31 (0,5% p/v) a las meQ (1% p/v) se obtuvo en buffer fosfato salino (PBS; pH 7,2) bajo agitación permanente (60 rpm) a 37º durante toda la noche (ON). Luego la suspensión fue centrifugada (3000 rpm, 15 min) y el pellet liofilizado. La caracterización del estado sólido se realizó por: SEM, microscopía óptica, medición del tamaño de partícula y del potencial electrocinético (potencial zeta). Para determinar la tasa de liberación de rBLSOmp31 desde las meQ las partículas liofilizadas se suspendieron en PBS (pH 7,2) y se agitaron (60 rpm 180 min) a 37ºC. A distintos intervalos se centrifugó, se tomó una muestra del sobrenadante y se determinó la concentración de proteína mediante el método de BCA en microplaca (lectura a 570 nm, Titertek, Multiscan EX, Labsystems). Resultados y Discusión. Los resultados reflejan un alto rendimiento en el proceso de obtención de las meQ (68,95%). El análisis microscópico y las microfotografías obtenidas por SEM mostraron partículas esféricas y uniformes, con un tamaño promedio de 5,37 µm ±4,3 y potencial zeta de +33,07 mV. La eficiencia de carga de rBLSOMP31 en las meQ fue 43,4%. La Figura 1 muestra una liberación prolongada de la proteína en función del tiempo. Estos resultados indican que el método de secado por spray es adecuado para la obtención de meQ ya que se obtienen partículas homogéneas y con potencial zeta positivo. Esto aumentaría de manera significativa el tiempo de contacto de la formulación meQ-rBLSOMP31 con la mucosa intranasal la cual posee carga negativa. Además, cabe destacar que rBLSOMP31fue cargada sobre las meQ mediante un procedimiento simple y económico. De esta manera, la proteína se liberaría en forma controlada en el sitio de aplicación lo cual favorecería su captación y adecuado procesamiento por las células del sistema inmunitario de las mucosas, estimulando una respuesta inmune local y en mucosas distantes (p. ej. tracto reproductor). Los resultados obtenidos nos alientan a ensayar esta formulación en el ovino como una alternativa vacunal simple y económica contra una de las enfermedades reproductivas más importantes: la brucelosis ovina.