Estudio de prevalencia de genes codificantes de factores de virulencia de Escherichia coli en terneros de rodeos lecheros de la Cuenca Mar y Sierras

CHRISTENSEN, S.; BILBAO, G; PADOLA, N.L; ECHEVERRIA, A.I.; COLELLO, R.; PINTO DE ALMEIDA CASTRO,A.; SOTO, P.; MONTEAVARO C.

Tucuman

Congreso; XX Reunión Científico Técnica de la AAVLD; 2014

Asociación Argentina de Veterinarios de Laboratorios de Diagnóstico (AAVLD)

INTRODUCCIÓN Escherichia coli es de gran importancia como uno de los agentes patógenos involucrados en la diarrea neonatal bovina; se establece tempranamente en el intestino y permanece como parte de la flora normal a través de la vida del animal. Solamente una proporción de cepas son patógenas y se las clasifica en categorías o patotipos basados en la producción de diversos factores de virulencia y sobre los mecanismos por los cuales ellos causan enfermedad entérica o extraintestinales. El presente trabajo tiene como objetivo detectar la presencia de genes de virulencia y toxicidad en cepas de E.coli, asociados a enteropatías y procesos septicémicos en terneros neonatos con y sin signos diarreicos. MATERIALES Y METODOS En 50 establecimientos lecheros de la Cuenca Mar y Sierras se analizaron un total de 726 muestras de materia fecal de terneros con y sin signos diarreicos. Se realizó un hisopado de la mucosa rectal en profundidad y se colocó en medio de transporte Stuart, posteriormente el hisopo se sembró por estrías sobre placa de agar Mac Conkey, cultivándolos a 37°C durante 24 h en aerobiosis. De la zona de crecimiento confluente se realizó un ?escobillado? el cual se sembró en 30 ml de caldo LB, posteriormente incubado en agitación a 37º C a 100 rpm durante 4 h. Luego se tomaron 800 ul del caldo y se le agregó 200 ul de glicerol conservándolo a -70°C hasta su procesamiento. A partir de esta muestra se realizó la extracción de ADN para luego realizar la técnica de PCR (reacción en cadena de la polimerasa) que para detectar genes codificantes eae, vt1 y vt2, se utilizó PCR multiplex y PCR simple para detectar sta y f17 para determinar los virotipos VTEC, EPEC, ETEC y EXEC. Los productos de PCR se visualizaron por medio de electroforesis en gel de agarosa 2% y se revelaron con bromuro de etidio. RESULTADOS La prevalencia de los genes codificantes en los tambos fueron: eae, 96%, vt1, 92%; vt2, 86%; sta, 64% y f17 en el 62%. En los terneros la prevalencia de los genes codificantes fué desde un 13,1% a 37,9% y en forma proporcional entre terneros con y sin signos diarreicos. La edad con mayor presentación de genes codificantes de virulencia es entre la segunda y quinta semana de vida, destacándose la segunda semana como la de mayor frecuencia. DISCUSIÓN Es de destacar que más del 60% de los establecimientos lecheros poseen E.coli con genes codificantes de virulencia y que un alto porcentaje de terneros son portadores de los mismos, presentando o no signos diarreicos. Los signos de enfermedad dependerán de la competencia a nivel intestinal con otras bacterias y de factores que permitan la expresión de los factores de virulencia. La presencia de vt1 y vt2 confirman la importancia de estos animales como reservorios de E.coli verotoxigénica (VTEC) patógena para los humanos. Sin embargo se han detectado determinados serotipos de VTEC que causan diarrea en terneros ya sea en forma natural o experimental. La detección temprana de los genes codificantes de virulencia indica el contagio del ternero al nacimiento y la permanencia durante todo el período de crianza. Se concluye que E. coli con genes de virulencia eae, sta, f17, vt1 y vt2 presentó una sustancial distribución en terneros con y sin signos diarreicos en los establecimientos lecheros de la cuenca Mar y Sierra en la provincia de Bs. As. La mayor prevalencia de infección fue detectada en terneros de 2 semanas de vida.