TRITRICHOMONOSIS FELINA: CONSIDERACIONES PARA EL DIAGNÓSTICO PRECISO DEL PROTOZOARIO EN ARGENTINA

ESPINDOLA, J. A.; PALUDI, A.; DOUMECQ , M.L.; MONTEAVARO C.

Tucuman

Congreso; XX Reunión Científico Técnica de la AAVLD, Organizada por la Asociación Argentina de Veterinarios de Laboratorios de Diagnóstico (AAVLD); 2014

Asociación Argentina de Veterinarios de Laboratorios de Diagnóstico AAVLD

Introducción.Tritrichomonas foetus es un protozoario, anaerobio aerotolerante y flagelado que coloniza el íleon, ciego y colon felino, actúa como agente de la diarrea crónica del intestino grueso, denominada por Gookin en el año 1991 como tritrichomosis felina3 . Históricamente ha sido asociado como agente etiológico de una enfermedad venérea que produce muerte embrionaria con altas pérdidas económicas en la producción bovina. Los gatos menores de 2 años y aquellos que viven en criaderos o gaterios son los más afectados, no hay predilección etaria, sexual o racial1, 3. Algunos de los factores predisponentes son: el hacinamiento, el estrés, la falta de higiene, las coinfecciones con otros protozoarios intestinales, como Giardias y coccidios y la importación de animales portadores provenientes de países con alta prevalencia, como Estados Unidos y Alemania1. La transmisión es fecal-oral y los signos clínicos aparecen entre los 4 -14 días luego de la exposición. El cuadro clínico puede ser variable desde asintomático a una diarrea fétida, pastosa, muchas veces con estrías de sangre y moco. La flatulencia, el tenesmo, la irritación anal es frecuente y el prolapso rectal en algunos casos3. En Argentina, si bien la mayoría de los clínicos veterinarios tienen en cuenta las parasitosis en general como diagnóstico primario de diarrea crónica en gatos, la diferenciación de los agentes causales. requiere de una observación microscópica minuciosa del material enviado en directo o con coloración T 15 o Giemsa, para diferenciar morfológicamente los distintos protozoarios como Giardias spp, Pentatrichomonas hominis , Tetratrichomonas y T. foetus 1,3,4. Para un diagnóstico preciso de estos agentes, se debe contar con materia fecal fresca, para observar la motilidad característica de cada protozoario y confirmar la presencia o ausencia de quistes de Giardia considerando su alta incidencia. La muestra puede ser tomada directamente del recto con hisopo o termómetro que luego se humedece con solución fisiológica tibia y se observa buscando parásitos con motilidad. Si se trata de heces recogidas en el domicilio deben ser transportadas en un contenedor adecuado a la clínica, conteniendo 3 ml de solución fisiológica por cada 3 g de muestra, y no deben ser refrigeradas. El diagnóstico definitivo se realiza mediante los cultivos en medios especiales como el sistema comercial específico, In PouchTM TF feline (BioMed Diagnostics) 2 o el medio de cultivos entre ellos el medio de Diamond modificado o TYM (Triptosa, yeast, maltose). En nuestro país existen 2 reportes donde se utilizó el sistema comercial para su diagnóstico2. El objetivo del presente trabajo fue evaluar los métodos de diagnósticos utilizados de rutina para tritricomonosis bovina, basados en el cultivo en medio TYM, para el diagnóstico de tritrichomonosis felina. Materiales y Métodos. Se tomaron 34 muestras al azar de gatos, en distintas veterinarias y de criaderos, durante un año con o sin diarrea. Las razas predominantes fueron Bosque de Noruega y Europeo Común, en la Ciudad Autónoma de Buenos Aires y Mar del Plata. La toma de las muestras se realizó mediante hisopados rectales humedecidos en PBS (pH: 7.2) a temperatura ambiente. Las muestras fueron sembradas en medio TYM (con 0,5g/L de agar y sin agar) con el agregado de suero bovino estéril al 10%, inactivado por 30? a 56ºC. La concentración de Penicilina G 1000 UI/ml (Fluka), Estreptomicina 1g/L (Fluka), Nistatina 436 UI/ml (Parafarm). Se incubaron a 35 (+/- 2) ºC y se observaron cada 24 h hasta los 7 días mediante la observación microscópica directa del tubo con microscopio óptico con objetivo de 10X. Para confirmar la presencia de protozoarios con motilidad y morfología compatible con T. foetus, se tomó una alícuota sobre portaobjeto y se observó con objetivo 10X. Luego se procedió a la coloración con Tincion15 (Laboratorio Biopur) y observación con objetivo de inmersión de 100x. También a partir de las muestras enviadas y cultivadas en medio Diamond (TYM: tryptose yeast maltose) se realizó la extracción del ADN y se preparó el inóculo para su confirmación por PCR utilizando los primers que amplifican un producto de 372 bp TFR-1, TFR-2 común a toda la familia Trichomonadidae y luego se utilizaron primers que amplifican un producto de 347 bp específicos para T. foetus: TFR-3 y TFR-4. Resultados. De las muestras procesadas por cultivo se obtuvo una muestra positiva (1/34) a la presencia de T. foetus. Esta muestra pertenece a un felino hembra de la raza Bosque de Noruega, de 2 años. El felino no presentaba signos de diarrea en el momento del muestreo. El diagnóstico se realizó a partir del medio TYM con observación directa a través del tubo a las 72 h posteriores a la siembra, presentando morfología y movilidad característica del protozoario. En el subcultivo de las 24 h se observó un mejor desarrollo en el medio que contenía agar. Mediante la tinción 15 se observó la morfología compatible y mediante la técnica de PCR se confirmo la familia Trichomonadidae y género T. foetus. La cepa se mantiene en nitrógeno líquido para futuros estudios de caracterización patogénica. Discusión. La tricomonosis felina es una enfermedad con bajo número de reportes en Argentina. Estos fueron diagnosticados mediante el uso de un sistema comercial In PouchTM Tf feline. Para el diagnóstico de esta enfermedad es importante la toma de muestra de materia fecal fresca directa del recto ya sea para la observación y/o el cultivo. A partir de los resultados obtenidos podemos concluir que la metodología utilizada de rutina en el diagnóstico de la tricomonosis bovina es adecuada para el diagnóstico y aislamiento de T. foetus a partir de una muestra de materia fecal de felinos.