Infección experimental de terneros con herpesvirus bovino 4

VERNA, A; PEREZ, S. E; LEUNDA, M; MORÁN, P; GONZALEZ ALTAMIRANDA, E; FIORANI, F; ARAOZ, V; MARIN, M; PEREYRA, S; DÍAZ FLORES, I; ODEÓN, A

Tucumán

Jornada; XX Reunión científico-técnica de la Asociación Argentina de Laboratorios de Diagnóstico Veterinario; 2014

AALDV

Introducción.  El herpesvirus bovino 4 (BoHV-4) pertenece a la familia Herpesviridae, subfamilia Gammaherpesvirinae, género Rhadinovirus (Zimermann et al., 2001). En Argentina, BoHV-4 se aisló y caracterizó molecularmente en el año 2007, a partir de muestras de vacas abortadas remitidas al Servicio de Diagnóstico Veterinario Especializado (SDVE) del INTA Balcarce (Verna et al., 2008). Desde el año 2008-2013 se registraron nuevos casos en la Provincia de Buenos Aires, donde la principal problemática se asoció con hembras bovinas abortadas. También se han obtenido aislamientos de BoHV-4 a partir de células de la granulosa de ovocitos provenientes de ovarios de matadero utilizados para realizar fecundación in vitro, de hisopados nasales (bovinos y búfalos), y  de semen congelado perteneciente a un centro de reproducción (Lomónaco et al., 2009, Morán et al., 2013). En el 2012, Verna et al., reportaron la caracterización molecular de cepas aisladas de hembras bovinas que habían abortado, donde se describe la existencia en Argentina de cepas correspondientes al grupo prototipo Movar 33/66, Americano DN599 y Genotipo 3, un nuevo grupo sólo descripto en Argentina. Estos resultados sugieren un contexto epidemiológico complejo para las cepas de BoHV-4 circulantes en Argentina, probablemente influenciados por la deriva genética. Aún se desconoce la patogenicidad de las cepas de BoHV-4  y si  desempeña un papel activo primario en la iniciación de la enfermedad o si actúa como un patógeno secundario. El principal objetivo de este estudio fue evaluar la patogenicidad de dos cepas de BoHV4 genéticamente divergentes y determinar la presencia de anticuerpos neutralizantes en terneros inoculados experimentalmente. Materiales y Métodos: Se utilizaron un total de 15 terneros, los cuales fueron divididos en 3 tres grupos de 5 animales cada uno. Grupo 1: Terneros 3-7-8-11 y 12; Grupo 2: Terneros 4-9-10-13-14 y Grupo 3: Terneros 1-2-5-6 y 15. Grupo 1 y 2 fueron inoculados vía intranasal con la cepa 07/435 y la 10/154, molecularmente caracterizadas como genotipo 3 y prototipo Americano DN599, respectivamente. Los grupos experimentales se mantuvieron en premisas separadas para evitar infecciones cruzadas. Se colectaron muestras de sangre con anticoagulante para obtener buffy coat, hisopados nasales e hisopados oculares durante los días  (0.1.2.4.5.6.7.8.9.10.11.14), además a los 25 días post-infección se obtuvieron muestras solo del grupo 1. Las muestras se destinaron a aislamiento virológico y detección de ADN viral por PCR. Se realizó seroneutralización con muestras de sueros con el objetivo de evaluar la presencia de anticuerpos neutralizantes para los tiempos 4.7.14 y 25. Resultados: Los resultados de los aislamientos y detección de ADN viral se presentan en la Tabla 1. Ambas cepas se aislaron de los animales inoculados, si bien se observaron diferencias entre los grupos en cuanto a la muestra de origen (hisopado ocular y/o hisopado nasal). Todos los aislamientos fueron corroborados mediante PCR (gen B y B4up/B4low). No se logró aislar el virus a partir de buffy coat, aunque se detectó ADN viral en ambos grupos sólo en los tiempos 7 y 14. Se observaron anticuerpos neutralizantes al enfrentar la cepa 07/435 con sueros homólogos y heterólogos (título máximo 1:64) y se observó seroconversión al T25 en un ternero mientras que para la cepa 10/154 los resultados fueron negativos en ambas situaciones. Discusión: El presente trabajo demostró que ambas cepas de BoHV4 fueroncapaces de replicar en los terneros, lográndose el aislamiento viral esporádico a partir dehisopado nasales y oculares durante al menos 14 días después de la inoculación. El aspecto más relevante de este estudio fue la capacidad de detectar anticuerpos neutralizantes en los terneros experimentales con cepas 07/435, no observándose reacción cruzada con la cepa 10/154. En este estudio se confirma  una significativa diferencia en la variabilidad genómica entre las cepas utilizadas, y se sugiere que se deben hacer más esfuerzos para una mejor comprensión de los fenómenos involucrados en la inmunidad de lasinfecciones inducidas por BoHV4