MULTIRRESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS Y PRESENCIA DE INTEGRONES EN E. coli AISLADAS DE CERDOS EN UNA GRANJA DE LA PROVINCIA DE BUENOS AIRES

DE LA TORRE EULALIA; COLELLO ROCIO; PADOLA NORA LIA; ETCHEVERRÍA ANALIA; AMANTO FABIAN; TAPIA MARIA OFELIA; SORACI ALEJANDRO

Mar del Plata

Jornada; 8vas Jornadas Internacionales de Veterinaria Práctica; 2013

Colegio Veterinarios de la Prov de Buenos Aires

INTRODUCCIÓN Durante los últimos años, la utilización de agentes antimicrobianos ha aumentado notablemente, no solo en medicina humana sino también en veterinaria (Angulo y col., 2004). Existe una creciente evidencia que el uso de antimicrobianos en animales de consumo ya sea con fines terapéuticos, profilácticos o como promotores del crecimiento proporciona una fuerte presión selectiva que promueve la aparición de resistencia antimicrobiana (Barbosa y Levy, 2000). El tracto gastrointestinal de los animales es el principal reservorio y sitio de propagación de bacterias, pero también es un ambiente especial para el intercambio de información genética (Lapierre y cols., 2008). En bacterias Gram-negativas, los integrones son elementos genéticos que contribuyen a la propagación horizontal de multirresistencia a antibióticos (Di Conza y Gutkind, 2010). Por lo tanto, la vigilancia de la microflora comensal, tales como cepas de Escherichia coli (E. coli), es un buen indicador de los patrones de resistencia dentro de una población, ya que se encuentran con frecuencia y adquieren fácilmente la resistencia (Sáenz y col., 2004). Teniendo en cuenta lo expuesto anteriormente, el objetivo del trabajo fue evaluar la susceptibilidad a diferentes antibióticos y la presencia de integrones en cepas de E. coli comensales aisladas de cerdos durante las diferentes etapas de producción. MATERIALES Y MÉTODOS Las muestras se obtuvieron en una granja comercial de la provincia de Buenos Aires, Argentina. La explotación está organizada de manera intensiva, en confinamiento total, con ciclo completo y cuenta con 400 hembras en producción. El uso de antibióticos es restringido, el productor y/o veterinario a cargo sólo utilizan antibióticos por vía oral o inyectable durante períodos cortos de tiempo para el tratamiento de brotes infecciosos puntuales, en general no más de 2 semanas al año. Las muestras de materia fecal se tomaron mediante hisopos estériles a 5 cerdas post parto y a 5 lechones de cada camada (n=25, maternidad). Estos últimos se muestrearon nuevamente a los 21 días (destete) y los 70 días (terminación). Las muestras fecales se cultivaron en caldo LB y luego una alícuota se cultivó en placas de agar MacConkey. Post incubación a 37ºC durante 24h se seleccionaron colonias características de E. coli. En total se aislaron 17 colonias de cerdas y 109 de los lechones. Las colonias se confirmaron como E. coli por PCR mediante la detección del gen de la proteína universal de estrés (uspA). El gen codificante de la integrasa 1 y la integrasa 2 fueron usados para identificar por PCR la presencia de integrones de clase 1 o clase 2, respectivamente. Para confirmar que las E. coli fueran comensales y no patógenas, en cada aislamiento se determinó la presencia de genes de virulencia característicos de los patotipos E. coli verotoxigénico, E. coli enteropatogénico y E. coli enterotoxigénico: vt1, vt2, vt2e, eae, Sta, Stb, lt, respectivamente. En cada aislamiento se determinó la susceptibilidad a 7 antibióticos por el método de difusión en agar según las normas del NCCLS. Como control se empleó la cepa de E. coli ATCC 25922. Los antibióticos en disco utilizados fueron: Tetraciclina (TET), Fosfomicina (FOSF), Tiamulina (TIA), Colistina (COL), Enrofloxacina (ENR), Florfenicol (FLOR) y Amoxicilina (AML). RESULTADOS Se aisló E. coli comensales en el 88,3% de los aislamientos de cerdas y en el 87,2% de lechones. En el 73,3% de los aislamientos de cerdas y en el 81,5% de los de lechones se detectaron integrones,  principalmente integrón clase 1 (47,7%). El integrón clase 2 fue detectado en el 42% de los aislamientos. El 100% de E. coli comensales integrones positivas mostraron resistencia a algún antibiótico. El mayor porcentaje de resistencia se observó para TET (96,6%), TIA (94,1%), ENR (68,2%), FLOR (60,2%) y AML (52.3%). Los perfiles de multirresistencia más frecuentes fueron TET-ENR-AML-FLOR-FOSF (22,7%), TET-TIA-ENR (13,6%,) y TET-ENR-AML-FLOR (12,5%). El 27,3 % de los aislamientos de las cerdas fueron resistentes a más de 2 antibióticos, mientras que en los lechones en maternidad fue del 72%. Este porcentaje aumentó significativamente en las últimas etapas de producción, destete (100%) y terminación (94,7%). DISCUSIÓN La aparición de multirresistencia bacteriana a los antibióticos se ha transformado en un problema de índole mundial. Nosotros determinamos un elevado porcentaje de multirresistencia en cepas de E. coli aisladas de cerdos. Varios autores han demostrado una amplia distribución de multirresistencia en cepas obtenidas de animales de consumo como ganado bovino, porcino y aves de corral (Lanz y col., 2003; Yang y col., 2004). Los porcentajes de resistencia más elevados se observaron con antibióticos que habitualmente se emplean en las explotaciones porcinas. Los valores de resistencia coinciden con los encontrados por otros autores al estudiar aislamientos provenientes de países en los cuales aún no se han desarrollado programas de vigilancia y monitoreo y en donde el empleo de agentes antimicrobianos no está debidamente regulado (Yang y col., 2004). Es importante destacar la presencia de cepas de E. coli resistentes en lechones de menos de 12 h de vida remarcando la importancia de la transmisión de dichas cepas a la camada al momento de comenzar el implante de su microbiota, porcentaje que aumenta durante las diferentes etapas de producción. Andraud y cols. (2011) observaron que la transmisión de cepas bacterianas resistentes entre individuos es un factor fundamental que permite la persistencia en granjas de cerdos y podría estar mediada por la presencia de integrones. En este trabajo se pudo determinar la existencia de integrones de clase 1 y/o clase 2 en las todas las cepas resistentes. CONCLUSIÓN Los cerdos son portadores de cepas de E. coli comensales con alto porcentaje de multirresistencia a antibióticos, siendo además portadoras de integrones que pueden jugar un papel clave en la diseminación de la resistencia tanto entre animales, medio ambiente, y alimentos lo que implica un gran impacto a nivel productivo y en la salud pública. BIBLIOGRAFíA - Andraud M, Rose N, Laurentie M, Sanders P, Le Roux A, Cariolet R, Chauvin C, Jouy E. (2011). Estimation of transmission parameters of a fluoroquinolone-resistant Escherichia coli strain between pigs in experimental conditions. Mathieu Veterinary Research 42:44.doi: 10.1186/1297-9716-42-44. -Angulo FJ, Nargund VN, Chiller TC. (2004). Evidence of an association between use of anti-microbial agents in food animals and anti-microbial resistance among bacteria isolated from humans and the human health consequences of such resistance. J Vet Med B Infect Dis Vet Public Health 51, 374-379.             - Barbosa TM, Levy SB. (2000). The impact of antibiotic use on resistance development and persistence. Drug Resist Updat 3, 303-311. - Di Conza JA, Gutkind GO. Integrons: gene collectors. (2010). Rev Argent Microbiol. 42, 63-78. - Lanz R, Kuhnert P, Boerlin P. (2003).Antimicrobial resistanceand gene determinants in clinical Escherichia coli fromdifferent animal species in Switzerland.VetMicrobiol91, 73-84. - Lapierre L, Cornejo J, Borie C, Toro C, San Martín B. (2008). Genetic Characterization of Antibiotic Resistance Genes Linked to Class 1 and Class 2 Integrons in Commensal Strains of Escherichia coli Isolated from Poultry and Swine. Microb Drug Resist. 14, 265-272. - Sáenz Y, Briñas L, Dominguez E, Ruiz J, Zarazaga M, Vila J, Torres C. (2004). Mechanisms of resistance in multiple-antibiotic-resistant Escherichia coli strains of human, animal and food origins. Antimicrob Agents Chemother 48, 3996-4001. - Yang H, Chen S, White D, Zhao S, McDermott P, Walter R, Meng J. (2004). 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