CIVETAN   23983
CENTRO DE INVESTIGACION VETERINARIA DE TANDIL
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
ESTUDIO DE LA PRESENCIA DEL GENOMA DE ALFA Y GAMMA HERPESVIRUS BOVINOS EN SEMEN
Autor/es:
MORÁN P., FAVIER P., CATENA M., CHIAPPARRONE L., ODEÓN A., VERNA A., PÉREZ S.
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Otro; XIX REUNIÓN CIENTÍFICO TÉCNICA; 2012
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Veterinarios de Laboratorios de Diagnóstico
Resumen:
La inseminación artificial (IA) es una práctica ampliamente difundida para mejorar la genética del ganado. Una desventaja de esta metodología es la potencial diseminación de enfermedades infecciosas mediante el uso de semen contaminado, no controlado. El herpesvirus bovino 1 (BoHV-1) es el principal agente viral asociado con desórdenes reproductivos en el ganado. Recientemente, el herpesvirus bovino 5 (BoHV-5) y el herpesvirus bovino 4 (BoHV-4) también han sido asociados con enfermedad reproductiva en el bovino. El BoHV-5, agente causal de meningoencefalitis no supurativa en terneros, fue detectado en casos de vulvovaginitis y aislado de semen de toros en ausencia de enfermedad clínica. El BoHV-4 es un gamma-herpesvirus que se aisló de animales sanos y de animales con diversas formas clínicas entre las que se incluyen, metritis, vaginitis y abortos. En 2007, el virus se identificó en muestras de abortos bovinos y en semen en Argentina. Los alfa-herpesvirus (BoHV-1 y BoHV-5)establecen latencia en neuronas sensoriales del ganglio trigémino o sacro, mientras que el BoHV-4 tiene como sitio de persistencia a los macrófagos/monocitos. El virus latente puede reactivarse periódicamente y transmitirse a hospedadores susceptibles a partir de distintas secreciones, incluyendo el semen. El objetivo de este estudio fue determinar la presencia del genoma de BoHV-1, 5 y 4 en semen bovino. Se analizaron 67 muestras de semen criopreservado de toros de rodeos de carne y leche, de origen nacional (n=48) e importado (n=19), provenientes de centros de IA(n=55) y de muestras obtenidas a campo y remitidas a centros de IA para su congelación (n=12). La extracción de ADN se realizó según lo descripto por Oliveira et al.(2011) a partir del semen diluido 1:20 en PBS. La detección de BoHV-1 y BoHV-5 fue efectuada por nested PCR, de acuerdo a lo descripto por Wang et al. (2001) y Campos et al. (2009), respectivamente. Para BoHV-4 se utilizó la PCR descripta por Wellemberg et al. (2001). Se incluyeron controles negativos (ADN de células MDBK no infectadas) y positivos (ADN de MDBK infectadas con cepas virales de referencia). La sensibilidad de las PCRs se determinó mediante diluciones seriadas en base 10 de semen negativo diluido 1:20 e inoculado con las cepas virales de referencia previamente tituladas. Alícuotas de ADN de cada dilución se sometieron a las distintas PCRs. Las nested PCRs para BoHV-1 y BoHV-5 fueron altamente sensibles para la detección de ADN viral en semen (5 x 10-6 y 4 x 10-4 TCID50, respectivamente). Como era esperado, la PCR convencional utilizada para la detección de BoHV-4 fue menos sensible(2 x 104 TCID50). El producto de amplificación específico para BoHV-1 se detectó en 4/67 (6 %) de las muestras. Todas las muestras de semen fueron negativas a BoHV-5 y BoHV-4. Las muestras positivas pertenecían a toros de razas lecheras alojados en dos centros de IA distintos. Una de las muestras positivas a BoHV-1 correspondió a semen importado. El hallazgo más importante de este estudio es la detección del genoma de BoHV-1 en semen de toros pertenecientes a centros de IA y, particularmente, a su identificación en muestras de semen de origen internacional. Este hallazgo tiene implicancia directa en los controles sanitarios que deberían realizarse para la importación/exportación de semen. Estos resultados también demuestran la necesidad de utilizar pruebas diagnósticas más sensibles antes de que los lotes de semen sean aprobados para su comercialización. Si bien el aislamiento en cultivo celular continúa siendo la técnica estándar para la detección de virus en semen; entre sus desventajas se encuentran la citotoxicidad de la muestra, el tiempo y el costo de la técnica. El aislamiento en cultivo celular para diagnóstico de BoHV en semen tiene limitaciones adicionales, como la baja concentración de virus eliminado en estas secreciones durante la reactivación viral. Por lo tanto, es importante usar herramientas más adecuadas y sensibles para la identificación viral en este tipo de muestras. En este estudio no fue posible detectar la presencia del genoma de BoHV-4. Aunque se desconoce la cantidad de partículas virales eliminadas en semen, es probable que esta sea igual o inferior al número de partículas de BoHV-1 excretadas. Las cepas de BoHV-5 se designan como subtipos “a”, “b” y “no a-no b”. La presencia transitoria del subtipo “b” sólo se describió en Argentina. No obstante, las cepas circulantes más comunes pertenecen al subtipo “a”. Las cepas “no a-no b” se reportaron en Brasil pero no en Argentina, por lo cual sería importante determinar si las cepas de BoHV-5 presentes en nuestro país difieren en su tropismo por el tracto genital. Además, se requerirán futuros estudios que involucren un mayor número de muestras para determinar si el semen bovino en Argentina es una ruta potencial de transmisión de estos virus.