Dinámica de infección con BLV en bovinos inoculados experimentalmente

FORLETTI, AGUSTINA; DOLCINI, GUILLERMINA; GUTIÉRREZ, SILVINA ELENA

Buenos Aires

Jornada; Jornadas Latinoamericanas sobre Leucosis Bovina; 2012

Sociedad Argentina de Virología (división de la AAM)

El Virus de la Leucosis Bovina (BLV) es un deltaretrovirus de alta prevalencia en los rodeos lecheros de nuestro país. Este virus es el agente etiológico de la LeucosisEnzoótica Bovina (EBL). La presentación clínicatumoral de la EBL se manifiesta en menos del 10% de los animales. El 30% de los animales infectados desarrolla linfocitosis persistente, un estadío que se caracteriza por un aumento significativo en el número de linfocitos B en sangre periféricay unaalta carga proviral. El 60% restante del universo de animales infectados permanece asintomático(Burny et al., 1985). Estudios previos de nuestro laboratorio en bovinos naturalmente infectados demostraron que la genética del hospedador está asociada con el desarrollo de dos perfiles de infección. Así, el perfil baja carga proviral está asociado a la presencia de los alelos BoLA DRB3*0902 y *1701 y el perfil de alta carga proviral a los alelos *1501 ó *1503(Juliarena et al., 2008). El objetivo del presente trabajo fue estudiar la dinámica de la infección con BLV en bovinos Holando Argentino portadores de alelos BoLA DRB3*1501 y *0902 inoculados experimentalmente. Para ello se seleccionaron 4 vacas BLV-negativas: 2 portadoras del alelo BoLA DRB3*0902 y 2 portadoras del alelo DRB3*1501, en ambos casos en heterocigosis. La selección de los animales BLV-negativos se realizó mediante serología para anticuerpos anti-BLV por el método de ELISA 108 y confirmación mediante PCR. La identificación de los alelos BoLA DRB3 se realizó mediante amplificación y secuenciación de 284 pares de bases del exón 2 del mencionado gen. Los animales seleccionados fueron inoculados por vía subcutánea con 100µl de sangre entera proveniente de un animal infectado que presentaba linfocitosis persistente. Se tomaron muestras de sangre periférica a intervalos regulares (de 2 a 7 días hasta la seroconversión, luego a intervalos de 15 a 30 días hasta los 16.5 meses post-inoculación (pi)) a partir de las cuales se separaron los leucocitos totales y el plasma. Las muestras destinadas al análisis de expresión se procesaron inmediatamente al pie del animal para evitar la activación transcripcional del virus fuera del animal y se almacenaron en RNA Later hasta su análisis. Se extrajo el RNA de estas muestras empleando Trizoly el DNA con columnas comerciales. Se cuantificó de manera absoluta la carga proviral por qPCR,la expresión de mRNA de TNF-α, INF-γ y TAX de manera relativa por qPCR y el título de anticuerpos contra la gp51 del virus por ELISA 108 en las muestras de plasma. El provirus comenzó a detectarse a los 15 a 23 días pi, alcanzando el valor máximo a los 30 a 37 días. Luego la carga proviral descendió en todos los animales hasta niveles indetectables entre los 73 y 244 días pi, manteniéndose en este nivel durante todo el período de observación (16.5 meses). Los valores de carga proviral en los animales inoculados oscilaron entre 11500 y 32700 copias/µg. En relación a la expresión de RNA no pudimos detectar niveles cuantificables de TNF-α, INF-γ ni de TAX en células mononucleares de sangre periférica. Finalmente la seroconversión de los 4 animales ocurrió entre los 30 y 43 días pi. Si bien el descenso de la carga proviral en los animales coincidió con la aparición de anticuerpos anti-gp51 en plasma, no se observó una correlación directa entre los títulos de anticuerpos anti gp51 y los valores de carga proviral. La inoculación experimental con BLV de estos animales permitió sentar las bases para futuros estudios longitudinales de la dinámica de infección en el hospedador natural.